WAY-600

N° de catalogueS2689 Lot :S268901

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Données techniques

Formule

C₂₈H₃₀N₈O

Poids moléculaire

494.59

Numéro CAS

1062159-35-6

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

22 mg/mL (44.48 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.04 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans l'ordre.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin d'ajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	1.100mg/ml (2.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 22 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin d'ajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	0.180mg/ml (0.36mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 3.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations d'un lot à l'autre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

WAY-600 est un inhibiteur puissant, ATP-compétitif et sélectif de mTOR avec une IC50 de 9 nM; ce composé bloque mTORC1/P-S6K(T389) et mTORC2/P-AKT(S473) mais pas P-AKT(T308); il est sélectif pour mTOR par rapport à PI3Kα (>100 fois) et PI3Kγ (>500 fois).

Cibles

mTOR

9 nM

In vitro

Immune-complex kinase assay shows mTORC2-specific substrate His6-AKT or the mTORC1 substrate His6-S6K is dose dependently inhibited by WAY-600. This compound globally inhibits mTOR signaling and AKT function in cellular models dose dependently. It profoundly inhibits cap-dependent and global protein synthesis in MDA361, human breast cancer cells. This chemical shows antiproliferative effects in various cancer cell lines involving G1 cell cycle arrest and selective apoptosis. It down-regulate angiogenic factors, VEGF and HIF-1α, in U87MG, MDA361 and LNCap cells.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Format DELFIA de FLAG-TOR purifié Les essais de routine avec le FLAG-TOR purifié (FL et 3.5) sont effectués dans des plaques à 96 puits comme suit. Les enzymes sont d'abord diluées dans un tampon d'essai kinase (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycérophosphate, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcystine LR et 100 lg/mL BSA). Dans chaque puits, 12 μL de l'enzyme diluée sont mélangés brièvement avec 0.5 μL d'inhibiteur test ou de véhicule témoin diméthylsulfoxyde (DMSO). La réaction kinase est initiée par l'ajout de 12.5 μL de tampon d'essai kinase contenant de l'ATP et de l'His6-S6K pour obtenir un volume de réaction final de 25 μL contenant 800 ng/mL de FLAG-TOR, 100 μM d'ATP et 1.25 μM d'His6-S6K. La plaque de réaction est incubée pendant 2 heures (linéaire de 1 à 6 heures) à température ambiante avec une légère agitation, puis terminée par l'ajout de 25 μL de tampon d'arrêt (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA et 20 mM EGTA). La détection DELFIA de l'His6-S6K phosphorylé (Thr-389) est réalisée à température ambiante en utilisant un anticorps monoclonal anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marqué avec de l'Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu par anticorps). Quarante-cinq microlitres du mélange de réaction kinase terminé sont transférés dans une plaque MaxiSorp contenant 55 μL de PBS. L'His6-S6K est laissé se fixer pendant 2 heures, après quoi les puits sont aspirés et lavés une fois avec du PBS. Cent microlitres de tampon DELFIA avec 40 ng/mL d'anticorps Eu-P(T389)-S6K sont ajoutés. La liaison de l'anticorps est poursuivie pendant 1 heure avec une légère agitation. Les puits sont ensuite aspirés et lavés quatre fois avec du PBS contenant 0.05% de Tween 20 (PBST). Cent microlitres de solution DELFIA Enhancement sont ajoutés à chaque puits et les plaques sont lues dans un lecteur de plaques PerkinElmer modèle Victor. Les données obtenues sont utilisées pour calculer l'activité enzymatique et l'inhibition enzymatique par des inhibiteurs potentiels.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells Concentrations 0-100 μM Temps d'incubation 24 or 48 hours Méthode For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Test kinase :^{^[1]}

Format DELFIA de FLAG-TOR purifié
Les essais de routine avec le FLAG-TOR purifié (FL et 3.5) sont effectués dans des plaques à 96 puits comme suit. Les enzymes sont d'abord diluées dans un tampon d'essai kinase (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycérophosphate, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcystine LR et 100 lg/mL BSA). Dans chaque puits, 12 μL de l'enzyme diluée sont mélangés brièvement avec 0.5 μL d'inhibiteur test ou de véhicule témoin diméthylsulfoxyde (DMSO). La réaction kinase est initiée par l'ajout de 12.5 μL de tampon d'essai kinase contenant de l'ATP et de l'His6-S6K pour obtenir un volume de réaction final de 25 μL contenant 800 ng/mL de FLAG-TOR, 100 μM d'ATP et 1.25 μM d'His6-S6K. La plaque de réaction est incubée pendant 2 heures (linéaire de 1 à 6 heures) à température ambiante avec une légère agitation, puis terminée par l'ajout de 25 μL de tampon d'arrêt (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA et 20 mM EGTA). La détection DELFIA de l'His6-S6K phosphorylé (Thr-389) est réalisée à température ambiante en utilisant un anticorps monoclonal anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marqué avec de l'Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu par anticorps). Quarante-cinq microlitres du mélange de réaction kinase terminé sont transférés dans une plaque MaxiSorp contenant 55 μL de PBS. L'His6-S6K est laissé se fixer pendant 2 heures, après quoi les puits sont aspirés et lavés une fois avec du PBS. Cent microlitres de tampon DELFIA avec 40 ng/mL d'anticorps Eu-P(T389)-S6K sont ajoutés. La liaison de l'anticorps est poursuivie pendant 1 heure avec une légère agitation. Les puits sont ensuite aspirés et lavés quatre fois avec du PBS contenant 0.05% de Tween 20 (PBST). Cent microlitres de solution DELFIA Enhancement sont ajoutés à chaque puits et les plaques sont lues dans un lecteur de plaques PerkinElmer modèle Victor. Les données obtenues sont utilisées pour calculer l'activité enzymatique et l'inhibition enzymatique par des inhibiteurs potentiels.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
Concentrations
0-100 μM
Temps d'incubation
24 or 48 hours
Méthode
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Références

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

Validation du produit par le client

: Données de [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7. ]

Selleck's WAY-600 A été cité par 3 Publications

Disruption of FOXO3a-miRNA feedback inhibition of IGF2/IGF-1R/IRS1 signaling confers Herceptin resistance in HER2-positive breast cancer [ Nat Commun, 2021, 12(1):2699]	PubMed: 33976188
A Regulatory Circuit Orchestrated by Novel-miR-3880 Modulates Mammary Gland Development [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:383]	PubMed: 32656203
MEK-ERK inhibition potentiates WAY-600-induced anti-cancer efficiency in preclinical hepatocellular carcinoma (HCC) models [Wang K, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7]	PubMed: 27107695

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Les produits Selleck sont transportés à température ambiante. Si vous recevez le produit à température ambiante, soyez assuré que le service d'inspection de la qualité de Selleck a mené des expériences pour vérifier que le placement à température normale pendant un mois n'affectera pas l'activité biologique des produits en poudre. Après réception, veuillez stocker le produit conformément aux exigences décrites dans la fiche technique. La plupart des produits Selleck sont stables dans les conditions recommandées.

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