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Hesperadin Inhibiteur d'Aurora B

Réf. CatalogueS1529

Hesperadin inhibe puissamment Aurora B avec une IC50 de 250 nM dans un essai sans cellules. Il réduit nettement l'activité de l'AMPK, de la Lck, du MKK1, du MAPKAP-K1, du CHK1 et du PHK, tandis qu'il n'inhibe pas l'activité du MKK1 in vivo.
Hesperadin Aurora Kinase Inhibiteur Chemical Structure

Structure chimique

Poids moléculaire: 516.65

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Contrôle Qualité (Quality Control)

Lot : Pureté : 99.09%
99.09

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Lignées cellulaires Type d'essai Concentration Temps d'incubation Formulation Description de l'activité PMID
HepG2 cells Cytotoxicity assay 48 h Cytotoxicity against human HepG2 cells after 48 hrs by MTT assay, TC50=0.2 μM
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Informations chimiques, stockage et stabilité (Chemical Information, Storage & Stability)

Poids moléculaire 516.65 Formule

C29H32N4O3S

 Stockage (À compter de la date de réception)
N° CAS 422513-13-1 Télécharger le SDF Stockage des solutions mères

Synonymes N/A Smiles CCS(=O)(=O)NC1=CC2=C(C=C1)NC(=C2C(=NC3=CC=C(C=C3)CN4CCCCC4)C5=CC=CC=C5)O

Solubilité (Solubility)

In vitro
Lot:

DMSO : 100 mg/mL (193.55 mM)
(Le DMSO contaminé par l'humidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse Concentration Volume Poids moléculaire
Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo
Lot:

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant l'expérience)

mg/kg g μL

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter d'abord s'il n'y a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter d'abord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH2O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant d'ajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous d'ajouter le(s) solvant(s) dans l'ordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de l'ajout précédent, est une solution claire avant de procéder à l'ajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme d'action (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
TbAUK1
(Cell-free assay)
40 nM
Aurora B (human)
(Cell-free assay)
250 nM
In vitro
Hesperadin inhibe la capacité de l'Aurora B immunoprécipitée à phosphoryler l'histone H3 avec une IC50 de 250 nM et réduit nettement l'activité d'autres kinases (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 et PHK) à une concentration de 1 μM. En revanche, seulement 20-100 nM de ce composé sont suffisants pour induire la perte de la phosphorylation de l'histone H3-Ser10 mitotique dans les cellules HeLa. Son traitement provoque des défauts de mitose et de cytocinèse, entraînant l'arrêt de la prolifération des cellules HeLa et la polyploïdisation, qui peuvent être spécifiquement attribués à l'inhibition de la fonction d'Aurora B pendant le processus d'attachement des chromosomes. Ce composé (100 nM) lève rapidement l'arrêt mitotique induit par le taxol ou le monastrol, mais pas par le nocodazole. Son traitement et le traitement au nocodazole dans les cellules HeLa abolissent la localisation kinétochorienne de BubR1 et diminuent l'intensité de Bub1 au niveau des kinétochores, suggérant que la fonction d'Aurora B est nécessaire pour un recrutement kinétochorien efficace de BubR1 et Bub1, ce qui pourrait à son tour être nécessaire pour une signalisation prolongée du point de contrôle. Il empêche la phosphorylation de l'histone H3 recombinante de trypanosome par la Trypanosoma brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) de Trypanosoma brucei pathogène avec une IC50 de 40 nM dans des essais de kinase in vitro. Ce produit chimique inhibe significativement la croissance cellulaire des formes sanguines infectieuses cultivées (BF) avec une IC50 de 48 nM, et n'inhibe que faiblement la croissance cellulaire des formes procycliques du stade insecte (PF) avec une IC50 de 550 nM.
Essai kinase
Le dosage de la kinase Aurora B
Pour le dosage de la kinase Aurora B, les cellules HeLa sont lysées dans un tampon contenant 50 mM de NaCl. L'extrait cellulaire total est centrifugé à 13 000 tr/min pendant 20 minutes à 4 °C à l'aide d'une centrifugeuse de paillasse. Le culot obtenu à partir de 200 mg d'extrait cellulaire total est à nouveau extrait dans 15 mL de tampon de lyse contenant 250 mM de NaCl afin d'obtenir la kinase Aurora B active à partir de la chromatine mitotique. Le surnageant à faible vitesse de ce dernier extrait est utilisé pour l'immunoprécipitation. L'anticorps monoclonal de souris anti-AIM-1, ou l'anticorps de souris anti-HA, est couplé à la GammaBind Plus Sepharose, et les billes sont agitées en rotation dans l'extrait pendant 90 minutes à 4 °C. Les billes sont lavées, aliquotées et lavées dans un tampon de kinase (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 mM NaF). Le dosage de la kinase est effectué avec 10 μL de billes dans 20 μL de tampon de kinase contenant 5 μg d'histone H3, 10 μM d'ATP, 2,5 μCi de [γ-32P]ATP et différentes concentrations de ce composé pendant 20 minutes à 37 °C. Un tampon d'échantillon SDS est ajouté, et les échantillons sont bouillis et résolus par SDS-PAGE. Le gel est séché et le signal radioactif est détecté par analyse PhosphorImager. Les données sont analysées à l'aide du logiciel ImageQuant.
Références

Applications (Applications)

Méthodes Biomarqueurs Images PMID
Western blot trypanosome histone H3
S1529-WB1
19320832