PHA-793887 CDK Inhibiteur

Multi-CDK inhibitor.

PHA-793887 has low activity against CDK1, CDK4, CDK9 and GSK3β with IC50 of 60 nM, 62 nM, 138 nM and 79 nM, respectively. This compound inhibits cell proliferation of many tumor cell lines, including A2780, HCT-116, COLO-205, C-433, DU-145, A375, PC3, MCF-7, and BX-PC3, with IC50 of 88 nM–3.4 μM. It (1 μM) shows a decrease in the S phase, a subsequent increase of the G1 phase and a slight accumulation of G2/M phase in A2780 cells. This chemical (3 μM) significantly increases G2/M phase and reduces DNA synthsis. [1] It is cytotoxic for leukemic cell lines, including K562, KU812, KCL22, and TOM1, with IC50 of 0.3–7 μM, but it is not cytotoxic for normal unstimulated peripheral blood mononuclear cells or CD34+ hematopoietic stem cells. In colony assays, this compound shows very high activity against leukemia cell lines with IC50 less than 0.1 μM. It induces cell-cycle arrest, inhibits Rb and nucleophosmin phosphorylation, and modulates cyclin E and cdc6 expression at 0.2−1 μM and induces apoptosis at 5 μM. [2]

Essai de kinase CDK

L'activité biochimique des composés est déterminée par incubation avec des enzymes et des substrats spécifiques, suivie de la quantification du produit phosphorylé. PHA-793887 (1,5 nM–10 μM) est incubé pendant 30 à 90 minutes à température ambiante en présence d'un mélange ATP/³³P-γ-ATP, d'un substrat et de l'enzyme spécifique (0,7 à 100 nM) dans un volume final de 30 μL de tampon kinase, en utilisant des plaques à fond en U de 96 puits. Après incubation, la réaction est arrêtée et le substrat phosphorylé est séparé de l'ATP radioactif non incorporé à l'aide de billes SPA, de résine Dowex ou d'un filtre en phosphocellulose Multiscreen comme suit : (1) Pour les dosages SPA. La réaction est arrêtée par l'ajout de 100 μL de PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 μM ATP, contenant 1 mg de billes SPA enrobées de streptavidine. Après 20 minutes d'incubation pour la capture du substrat, 100 μL du mélange réactionnel sont transférés dans des plaques Optiplate de 96 puits contenant 100 μL de CsCl 5 M, laissés au repos pendant 4 heures pour permettre la stratification des billes au sommet de la plaque, et comptés à l'aide de TopCount pour mesurer le phosphate incorporé au substrat. (2) Pour le dosage sur résine Dowex. Une quantité de 150 μL de résine/formiate, pH 3,00, est ajoutée pour arrêter la réaction et capturer l'³³P-γ-ATP n'ayant pas réagi, le séparant du substrat phosphorylé en solution. Après 60 minutes de repos, 50 μL de surnageant sont transférés dans des plaques Optiplate de 96 puits. Après l'ajout de 150 μL de Microscint 40, la radioactivité est comptée dans le TopCount. (3) Pour le dosage Multiscreen. La réaction est arrêtée par l'ajout de 10 μL d'EDTA (150 mM). Une quantité de 100 μL est transférée dans une plaque MultiScreen pour permettre la liaison du substrat au filtre en phosphocellulose. Les plaques sont ensuite lavées trois fois avec 100 μL de H₂PO₄ (75 mM) filtré par un système de filtration MultiScreen, puis séchées. Après l'ajout de 100 μL de Microscint 0, la radioactivité est comptée dans le TopCount. Les valeurs IC50 sont obtenues par analyse de régression non linéaire.

PHA-793887 (10–30 mg/kg) shows good efficacy in the human ovarian A2780, colon HCT-116, and pancreatic BX-PC3 carcinoma xenograft models. [1] This compound (20 mg/kg) is effective in xenograft models of K562 and HL60 cells, primary leukemic disseminated model, and a high-burden disseminated ALL-2 model derived from a relapsed Philadelphia-positive acute lymphoid leukemia patient. [2]