Home Protein Tyrosine Kinase EGFR inhibitor Dacomitinib (PF-299804)

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Dacomitinib (PF-299804) HER Inhibitor

Réf. Catalogue: S2727

Dacomitinib is a potent, irreversible pan-ErbB inhibitor, mostly to EGFR with IC50 of 6 nM in a cell-free assay. Dacomitinib inhibits ERBB2 and ERBB4 with IC50 of 45.7 nM and 73.7 nM, respectively. Dacomitinib is effective against NSCLCs with EGFR or ERBB2 mutations as well as those harboring the EGFR T790M mutation. Dacomitinib inhibits cell growth and induces apoptosis. Phase 2.
Dacomitinib (PF-299804) EGFR inhibitor Chemical Structure

Structure chimique

Poids moléculaire: 469.94

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Contrôle Qualité (Quality Control)

Lot : Pureté : 99.84%
99.84

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Lignées cellulaires Type d'essai Concentration Temps d'incubation Formulation Description de l'activité PMID
PC9 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR exon 19 deletion activating mutant phosphorylation in human PC9 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.63 nM 23930994
human LoVo cells Function assay 2 h Inhibition of wild type EGFR phosphorylation in human LoVo cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.011 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR L858R/T970M double mutant phosphorylation in human NCI-H1975 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.042 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Proliferation assay Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells assessed as growth inhibition, GI50=0.1233 μM 26310890
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB1 (unknown origin) (Met-668 to Ala-1211 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.006 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 2 hrs Irreversible inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in EGF-stimulated mouse NIH/3T3 cells incubated for 2 hrs followed by stimulation with EGF for 10 mins, IC50 = 0.006 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB2 (unknown origin) (Ile-675 to Val-1256 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.046 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB4 (unknown origin) (Gly-259 to Gly-690 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.074 μM. 27491023
Sf9 Function assay 30 mins Irreversible inhibition of human recombinant GST-tagged JAK3 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in polyglutamic acid-tyrosine phosphorylation after 30 mins by ELISA, IC50 = 3.57 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 30 mg/kg 2 days In vivo inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in NIH/3T3 cells implanted in mouse at 30 mg/kg, po qd for 2 days measured 24 hrs post last dose by Western blot analysis 27491023
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human EGFR catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.006 μM. 28754471
NCI-H1819 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1819 cells expressing wild type HER2 incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.029 μM. 28754471
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human HER2 catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.0457 μM. 28754471
NCI-H1975 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells expressing EGFR T790M/L858R mutant incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.44 μM. 28754471
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Informations chimiques, stockage et stabilité (Chemical Information, Storage & Stability)

Poids moléculaire 469.94 Formule

C24H25ClFN5O2

 Stockage (À compter de la date de réception)
N° CAS 1110813-31-4 Télécharger le SDF Stockage des solutions mères

Synonymes PF299804,PF299 Smiles COC1=C(C=C2C(=C1)N=CN=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)NC(=O)C=CCN4CCCCC4

Solubilité (Solubility)

In vitro
Lot:

DMSO : 49 mg/mL (104.26 mM)
(Le DMSO contaminé par l'humidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Ethanol : 15 mg/mL

Water : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse Concentration Volume Poids moléculaire
Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo
Lot:

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant l'expérience)

mg/kg g μL

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter d'abord s'il n'y a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter d'abord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH2O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant d'ajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous d'ajouter le(s) solvant(s) dans l'ordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de l'ajout précédent, est une solution claire avant de procéder à l'ajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme d'action (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
EGFR
(Cell-free assay)
6.0 nM
ErbB2
(Cell-free assay)
45.7 nM
ErbB4
(Cell-free assay)
73.7 nM
In vitro

PF299804 est un inhibiteur spécifique de la famille des kinases ERBB. Ce composé inhibe la signalisation EGFR et induit l'apoptose dans la lignée cellulaire H3255 GR contenant EGFR T790M. Il est efficace dans les lignées cellulaires sensibles et NSCLC. Ce produit chimique inhibe la croissance des cellules H3255 et HCC827 modifiées pour exprimer EGFR T790M. Il inhibe la phosphorylation de EGFR en présence de la mutation T790M. On pense que cet agent inhibe de manière irréversible l'activité de la tyrosine kinase ERBB par liaison au site ATP et modification covalente des résidus cystéine nucléophiles dans les domaines catalytiques des membres de la famille ERBB. Il montre des effets inhibiteurs de croissance significatifs dans les cellules de cancer gastrique amplifiées HER2 (SNU216, N87), et il présente des valeurs de concentration inhibitrice de 50 % plus faibles par rapport aux autres inhibiteurs de la tyrosine kinase EGFR, notamment BIBW-2992 et CI-1033. Cet inhibiteur induit l'apoptose et l'arrêt en G1 et inhibe la phosphorylation des récepteurs de la famille HER ainsi que les voies de signalisation en aval, notamment STAT3, AKT et les kinases régulées par des signaux extracellulaires (ERK) dans les cellules de cancer gastrique amplifiées HER2. Il bloque également la formation d'hétérodimères EGFR/HER2, HER2/HER3 et HER3/HER4 ainsi que l'association de HER3 avec p85α dans les cellules SNU216. Une recherche récente utilise quarante-sept lignées de cancer du sein humain et de cellules épithéliales mammaires immortalisées pour évaluer les effets d'inhibition de ce composé ; les résultats indiquent qu'il inhibe préférentiellement la croissance des lignées cellulaires de cancer du sein amplifiées HER-2 par rapport aux lignées non amplifiées (RR = 3,39, p < 0,0001). Ce produit chimique réduit la phosphorylation de HER2, EGFR, HER4, AKT et ERK dans la majorité des lignées sensibles. Il exerce son effet anti-prolifératif par un arrêt combiné G0/G1 et une induction de l'apoptose.

Essai kinase
Dosage ELISA de la kinase ERBB
Les protéines de fusion cytoplasmiques ERBB1, ERBB 2 et ERBB4 sont produites par clonage de la séquence ERBB1 (Met-668 à Ala-1211), ERBB2 (Ile-675 à Val-1256) et de la séquence ERBB4 (Gly-259 à Gly-690) dans le vecteur baculoviral pFastBac par PCR. Les protéines sont exprimées dans des cellules d'insectes Sf9 infectées par le baculovirus sous forme de protéines de fusion GST. Les protéines sont purifiées par chromatographie d'affinité en utilisant des billes de glutathion-sépharose. L'inhibition de l'activité de la tyrosine kinase ERBB est évaluée à l'aide d'un test de récepteur tyrosine kinase basé sur un ELISA. Les réactions de kinase (50 mM HEPES, pH 7,4, 125 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 100 μM d'orthovanadate de sodium, 2 mM de dithiothréitol, 20 μM d'ATP, ce composé ou véhicule témoin, et 1-5 nM de GST-erbB par 50 μL de mélange réactionnel) sont effectuées dans des plaques de 96 puits recouvertes de 0,25 mg/mL de poly-Glu-Tyr. Les réactions sont incubées pendant 6 minutes à température ambiante tout en étant agitées. Les réactions de kinase sont arrêtées par retrait du mélange réactionnel, puis les puits sont lavés avec un tampon de lavage (0,1 % de Tween 20 dans du PBS). Les résidus de tyrosine phosphorylés sont détectés par l'ajout de 0,2 μg/mL d'anticorps antiphosphotyrosine (Oncogene Ab-4 ; 50 μL/puits) couplé à la peroxydase de raifort (HRP) dilué dans du PBS contenant 3 % de BSA et 0,05 % de Tween 20 pendant 25 minutes sous agitation à température ambiante. L'anticorps est retiré et les plaques sont lavées dans un tampon de lavage. Le substrat HRP (SureBlue3,3,5,5-tétraméthylbenzidine ou TMB) est ajouté (50 μL par puits) et incubé pendant 10-20 minutes sous agitation à température ambiante. La réaction au TMB est arrêtée par l'ajout de 50 μL de solution d'arrêt (0,09 N H2SO4). Le signal est quantifié en mesurant l'absorbance à 450 nm. Les valeurs d'IC50 sont déterminées pour ce composé en utilisant la méthode de l'effet médian.
In vivo

Le PF299804 administré par voie orale inhibe efficacement la croissance des xénogreffes HCC827 Del/T790M. Une faible administration orale de ce composé (15mg/kg) provoque une activité antitumorale significative, y compris des régressions tumorales marquées dans divers modèles de xénogreffes de tumeurs humaines qui expriment et/ou surexpriment des membres de la famille ERBB ou contiennent la double mutation (L858R/T790M) dans ERBB1 (EGFR).

Références
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22761403/

Applications (Applications)

Méthodes Biomarqueurs Images PMID
Western blot pEGFR / EGFR / pERK / ERK / pAKT / AKT / p-mTOR / mTOR / pSTAT3 / STAT3
S2727-WB1
24853121
Immunofluorescence LC3
S2727-IF1
28366635
Growth inhibition assay Cell viability
S2727-viability1
28363995

Informations sur l'essai clinique (Clinical Trial Information)

(données du https://clinicaltrials.gov, mis à jour le 2024-05-22)

Numéro NCT Recrutement Conditions Promoteur/Collaborateurs Date de début Phases
NCT06075615 Not yet recruiting
Carcinoma Non-Small-Cell Lung
Pfizer
 September 1 2024 --
NCT06321510 Not yet recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 April 1 2024 --
NCT04609319 Active not recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 January 23 2021 --
NCT03865446 Completed
Severe Hepatic Impairment
Pfizer
 April 5 2019 Phase 1
NCT02382796 Completed
NSCLC
Pfizer
 July 10 2015 Phase 2
NCT02268747 Unknown status
Skin Squamous Cell Cancer
Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori Milano
 November 2014 Phase 2

Foire aux questions (Frequently Asked Questions)

Question 1:
I would like to know whether the in vivo formulation you recommend for it is suitable for oral administration?

Réponse :
S2727 in 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80 at 10mg/ml is a homogeneous suspension, and it was fine for oral gavage. When preparing the solution, please dissolve it in DMSO clearly first. If it dissolves not readily, please sonicate and warm it at about 45-50℃ for a while to help dissolving. Then add PEG 300 and Tween 80. After they mixed well, dilute with water. Then it will become a homogeneous suspension.