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RepSox (E-616452) TGF-beta/Smad Inhibiteur

Réf. CatalogueS7223

RepSox (E-616452, SJN 2511, ALK5 Inhibitor II) est un inhibiteur puissant et sélectif du TGFβR-1/ALK5 avec une CI50 de 23 nM et 4 nM pour la liaison de l'ATP à ALK5 et l'autophosphorylation d'ALK5 dans des essais acellulaires, respectivement.
RepSox (E-616452) TGF-beta/Smad Inhibiteur Chemical Structure

Structure chimique

Poids moléculaire: 287.32

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Contrôle Qualité

Lot : Pureté : 99.92%
99.92

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail

Lignées cellulaires Type dessai Concentration Temps dincubation Formulation Description de lactivité PMID
baculovirus/Sf9 cells Function assay Inhibition of recombinant Activin A receptor type II-like kinase (ALK5) expressed in baculovirus/Sf9 cells, IC50=4 nM 15317461
HepG2 cells Function assay Stimulation of Transforming growth factor beta receptor I kinase in HepG2 cells, IC50=10 nM 15317461
Sf9 Function assay Inhibition of human ALK5 expressed in Sf9 insect cells using casein as substrate in presence of [gamma-33P]ATP, IC50 = 0.181 μM. 28135685
Sf9 Function assay Inhibition of mouse ABL expressed in Sf9 insect cells using GGEAIYAAPFKK as substrate in presence of [gamma-33P]ATP, IC50 = 21 μM. 28135685
HeLa Function assay 1 uM 30 mins Inhibition of ALK5 in serum starved human HeLa cells assessed as reduction in TGF-beta-induced SMAD2/3 nuclear transaction at 1 uM pre-incubated for 30 mins before TGF-beta stimulation for 30 mins by immunofluorescence analysis 28135685
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Informations chimiques, stockage et stabilité

Poids moléculaire 287.32 Formule

C17H13N5

 Stockage (À compter de la date de réception)
N° CAS 446859-33-2 Télécharger le SDF Stockage des solutions mères

Synonymes SJN 2511,ALK5 Inhibitor II Smiles CC1=NC(=CC=C1)C2=C(C=NN2)C3=NC4=C(C=C3)N=CC=C4

Solubilité

In vitro
Lot:

DMSO : 57 mg/mL (198.38 mM)
(Le DMSO contaminé par lhumidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculateur de molarité

Masse Concentration Volume Poids moléculaire
Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo
Lot:

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Saisir les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant lexpérience)

mg/kg g μL

Étape 2 : Saisir la formulation in vivo (Ceci est seulement le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter dabord sil ny a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter dabord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouterμL PEG300, mélanger et clarifier, puis ajouterμL Tween 80, mélanger et clarifier, puis ajouter μL ddH2O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, puis ajouter μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Note : 1. Veuillez vous assurer que le liquide est clair avant dajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous dajouter le(s) solvant(s) dans lordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue, lors de lajout précédent, est une solution claire avant de procéder à lajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie chaud peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme daction

Targets/IC50/Ki
TGFβR1(ALK5)
(Cell-free assay)
4 nM
In vitro

RepSox (E-616452) inhibe la liaison de l'ATP à ALK5 et l'autophosphorylation d'ALK5 avec des IC50 de 23 nM et 4 nM, respectivement. Il inhibe également l'activité luciférase PAI-1 cellulaire induite par TGF-β avec un IC50 de 18 nM.

Ce composé est capable de remplacer avec succès Sox2 dans la reprogrammation en inhibant la signalisation du facteur de croissance transformant-β (Tgf-β), ce qui induit à son tour l'expression de Nanog. L'effet de RepSox induisant la reprogrammation ne nécessite pas de remodelage de la chromatine. Il s'est avéré efficace pour générer des iPSCs.

Essai kinase
Essai de liaison par polarisation de fluorescence ALK5
La liaison du composé à l'ALK5 est testée sur de la GST-ALK5 recombinante purifiée (résidus 198-503). Le déplacement de l'inhibiteur compétitif de l'ATP marqué par la rhodamine verte par différentes concentrations de composés tests est utilisé pour calculer une pIC50 de liaison. La GST-ALK5 est ajoutée à un tampon contenant 62,5 mM d'Hepes, pH 7,5, 1 mM de DTT, 12,5 mM de MgCl2, 1,25 mM de CHAPS et 1 nM de ligand marqué à la rhodamine verte, de sorte que la concentration finale d'ALK5 soit de 10 nM, basée sur le titrage du site actif de l'enzyme. Quarante microlitres du réactif enzyme/ligand sont ajoutés à des plaques de dosage de 384 puits contenant 1 μL de différentes concentrations de RepSox (E-616452). Les plaques sont lues immédiatement sur un lecteur de fluorescence avec des filtres d'excitation, d'émission et dichroïques de 485, 530 et 505 nm, respectivement. La polarisation de fluorescence pour chaque puits est calculée par l'Acquest et est ensuite importée dans un logiciel d'ajustement de courbes pour la construction des courbes concentration-réponse.
In vivo

Lorsqu'il est injecté dans des blastocystes, RepSox (E-616452) est capable de contribuer à la formation d'embryons chimères in vivo. Un traitement d'un jour avec ce composé est suffisant pour remplacer la Sox2 transgénique.

Références
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32066676/

Applications

Méthodes Biomarqueurs Images PMID
Western blot α-SMA / Calponin / Histone H3
S7223-WB1
30365043
Immunofluorescence Smad2/3 / cytokeratin
S7223-IF1
28729719