3-Methyladenine (3-MA)

La légère préférence pour la prévention de Vps34 par la 3-Methyladenine (3-MA) provient probablement d'un cycle hydrophobe spécifique à Vps34, qui entoure le groupe 3-méthyle de ce composé. [1] Il a été rapporté qu'il provoque la mort des cellules cancéreuses dans des conditions normales et de famine, et qu'il pourrait également supprimer la migration et l'invasion cellulaires indépendamment de sa capacité à inhiber l'autophagy, ce qui implique qu'il possède des fonctions autres que la suppression de l'autophagy. Ce composé déclenche une mort cellulaire dépendante de la caspase qui est indépendante de l'inhibition de l'autophagy. Le traitement avec 5 mM de celui-ci réduit le pourcentage de cellules HeLa privées de glucose affichant des points GFP-LC3 à 23 %. Les niveaux de LC3-I augmentent et les niveaux de LC3-II diminuent entre 12 et 48 heures dans les cellules traitées avec 3-MA. La conversion de LC3-I en LC3-II est supprimée par le composé. Le traitement des cellules HeLa avec 2,5 mM ou 5 mM pendant un jour n'affecte pas la viabilité cellulaire, tandis que le traitement avec 10 mM pendant un jour provoque une diminution de 25,0 % de la viabilité cellulaire. Le traitement des cellules avec 2,5, 5 ou 10 mM pendant deux jours entraîne une diminution de la viabilité de 11,5 %, 38,0 % et 79,4 %, respectivement. Il diminue la viabilité cellulaire de manière dépendante du temps et de la dose, et raccourcit significativement la durée de l'arrêt de la prométaphase induit par le nocodazole. [2] La suppression de l'autophagy par le 3-MA inhibe la mort cellulaire induite par le SU11274. [3] Un traitement prolongé avec celui-ci (jusqu'à 9 heures) induit une conversion significative de LC3 I en II dans les MEF de type sauvage. Un traitement prolongé avec le 3-MA, mais pas la wortmannine, augmente nettement la ponctuation/agrégation de GFP-LC3. Sa conversion de LC3 induite et la libération de GFP libre sont dépendantes d'ATG7. Le traitement avec celui-ci conduit à une augmentation évidente du niveau de protéine p62. Le composé augmente le niveau de p62 même dans les MEF Atg5-/-- ainsi que dans les cellules avec délétion d'ATG5 médiatisée par la DOX. Il inhibe les PI3K de classe I et de classe III selon différents schémas temporels. Sa conversion de LC3 I en LC3 II induite est considérablement compromise dans les cellules Tsc2-/-- par rapport aux cellules de type sauvage. Ce composé perturbe la fonction anti-autophagique du complexe mTOR 1. [4]

La 3-Methyladenine (3-MA) bloque l'autophagy par son effet sur la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) de classe III. Le traitement avec ce composé ne modifie pas le degré d'hémorragie par rapport au groupe hémorragie sous-arachnoïdienne (HSA). Son prétraitement aggrave significativement les symptômes neurologiques par rapport au groupe HSA + véhicule. L'autophagy est diminuée lors de son application. Inversement, la caspase-3 clivée est nettement régulée à la hausse dans le groupe HSA + 3-MA. Conformément à la régulation à la hausse de l'expression de la caspase-3 clivée, le nombre de cellules TUNEL-positives dans le cortex droit est significativement augmenté dans le groupe HSA + 3-MA par rapport au groupe HSA + véhicule. [5]

• Essai de dégradation des protéines

  Les cellules HeLa sont radiomarquées pendant 24 heures avec 0,05 mCi/mL de l-[U- ¹⁴C]valine. À la fin de la période de marquage, les cellules sont rincées trois fois avec du PBS. Les cellules sont incubées pendant les temps désignés dans un milieu complet ou EBSS avec ou sans la présence de 10 mM de 3-Methyladenine (3-MA).

• Lignées cellulaires

  HeLa cell line

• Concentrations

  1-10 mM

• Temps dincubation

  24, 48 or 72 hours

• Méthode

  After treatment with 3-Methyladenine (3-MA), cell (such as HeLa cell) viability is determined by a trypan blue exclusion assay. Briefly, both adherent and floating cells are collected and suspended in phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4) at a final density of 1-2 × 10⁶/mL. An equal volume of 0.4% trypan blue solution (w/v, in PBS) is added to the cell suspension and mixed thoroughly. After incubation at room temperature for 3 min, cell counting is performed using a hemacytometer.

• Modèles animaux

  Adult male Sprague–Dawley rats weighing 300-350 g

• Posologies

  400 nM

• Administration

  Intracerebral ventricular