AT9283

AT9283 entraîne un phénotype polyploïde clair en inhibant l'activité de l'Aurora B kinase dans les cellules HCT116 avec une IC50 de 30 nM. De plus, ce composé produit également une puissante inhibition de la formation de colonies HCT116. [1]

Chez des souris porteuses de xénogreffes de carcinome colorectal humain HCT116, le traitement par AT9283 (15 mg/kg et 20 mg/kg) pendant 16 jours entraîne une inhibition significative de la croissance tumorale de 67% et 76%, respectivement. De plus, ce composé présente également une demi-vie significativement plus longue dans les tumeurs (2,5 heures) par rapport au plasma (0,5 heure) et une biodisponibilité orale modeste chez la souris (Fp.o. = 24%). [1]

• Tests de l'Aurora A et de l'Aurora B Kinase

  Les tests pour Aurora A et B sont effectués au format DELFIA. L'enzyme Aurora A est incubée avec AT9283 et 3 μM de substrat cross-tide (biotine-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG) dans 10 mM MOPS, pH 7, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% glycérol, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl₂, 0,01% β-mercaptoéthanol, 15 μM ATP, et 2,5% DMSO. L'enzyme Aurora B est incubée avec ce composé, 3 μM du substrat ci-dessus dans 25 mM Tris, pH 8,5, 5 mM MgCl₂, 0,1 mg/mL BSA, 0,025% Tween-20, 1 mM DTT, 15 μM ATP, et 2,5% DMSO. Les réactions sont laissées se dérouler pendant 60 minutes et 45-90 minutes pour Aurora A et Aurora B, respectivement, avant d'être stoppées avec de l'EDTA. Les mélanges réactionnels sont ensuite transférés dans une plaque revêtue de neutravidine, et le peptide phosphorylé est quantifié au moyen d'un anticorps phospho-spécifique et d'un anticorps secondaire marqué à l'europium en utilisant la fluorescence résolue dans le temps (excitation, 337 nm ; émission, 620 nm). Les valeurs d'IC50 pour les composés témoins sont de 92 nM (test Aurora A) et 17 nM (test Aurora B).

• Lignées cellulaires

  HCT 116 cells

• Concentrations

  1 nM - 10 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  HCT 116 cells are cultured in DMEM + 10% FBS + GLUTAMAX I. Black 96-well flat-bottomed (clear) tissue culture treated plates are seeded in 200 μL of medium and incubated for approximately 16 hours at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO₂ in air. Cells are treated with test compound at nine different concentrations (spanning 1 nM to 10 μM, plus DMSO vehicle control) and then incubated for 72 hours. Polyploidy morphological observations of the cells are then noted. The concentration of AT9283 required to produce a distinct polyploid phenotype is reported. Cells are seeded at a concentration of 75−100 cells/mL relevant culture media onto 6- or 24-well tissue culture plates and allowed to recover for 16 hours. This compound (11 concentrations spanning 0.1 nM to 10 μM) or vehicle control (DMSO) is added to duplicate wells to give a final DMSO concentration of 0.1%. Following compound addition, colonies are allowed to grow between 10 and 14 days for optimum discrete colony counting. Colonies are fixed in 2 mL of Carnoys fixative (25% acetic acid, 75% MeOH) and stained in 2 mL of 0.4% w/v crystal violet. The numbers of colonies in each well is counted. IC50 values are calculated by sigmoidal dose-response (variable slope) IC50 curves using Prism Graphpad software.

• Modèles animaux

  HCT116 cells are injected s.c. Into the hind flank of male BALB/c mice.

• Posologies

  15 mg/kg and 20 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p.