Saracatinib (AZD0530)

Le Saracatinib (AZD0530) inhibe également puissamment d'autres membres de la famille des tyrosine kinases Src, y compris c-Yes, Fyn, Lyn, Blk, Fgr et Lck avec des IC50 de 4 à 10 nM. Il inhibe de manière sensible Src Y530F NIH 3T3 avec une IC50 de 80 nM. Ce composé altère significativement l'invasion des cellules HT1080 à travers une matrice de collagène tridimensionnelle et inhibe complètement la dispersion cellulaire induite par l'EGF dans les cellules de cancer de la vessie NBT-II. [1] Il inhibe puissamment l'activation de Src dans les cellules DU145 et PC3, par inhibition de la phosphorylation de Y419. Il inhibe la croissance des cancers de la prostate, y compris PC3, DU145, CWR22Rv1 et LNCaP, tout en montrant une faible activité dans les cellules LAPC-4, PZ-HPV7 et RWPE-1. Il induit un arrêt du cycle cellulaire en G1/S mais pas les clivages de la caspase 3. Il inhibe également significativement la migration des DU145 et PC3 dans la chambre de Boyden. [2] Il provoque un blocage puissant et soutenu d'AKT et améliore la sensibilité à l'irradiation dans les cellules A549 et Calu-6. [3] Il inhibe l'ostéoclaste en activité, résorption et formation. Il empêche également de manière réversible la migration des précurseurs d'ostéoclastes. [4]

Le Saracatinib (AZD0530) montre une grande inhibition de la croissance tumorale dans les allogreffes Src3T3 et un délai de croissance modéré dans les xénogreffes Calu-6, MDA-MB-231, AsPc-1 et BT474C. [1] Ce composé montre également une grande activité antitumorale chez les souris xénogreffées orthotopiques DU145 à une dose de 25 mg/kg (administrée oralement, quotidiennement). [2]

• Essai Kinase

  L'IC50 de l'activité tyrosine kinase est mesurée par un dosage immunoenzymatique (ELISA) avec des domaines catalytiques recombinants d'un panel de récepteurs et de tyrosine kinases non-récepteurs (dans certains cas, seule une partie du domaine catalytique est utilisée). Ce composé est dosé dans une gamme de 0,001 à 10 mM. Des dosages de spécificité contre un panel de sérine/thréonine kinases sont réalisés à l'aide d'un essai de capture sur filtre avec du ³²P. En bref, des plaques 384 puits multidrop contenant 0,5 μL de Saracatinib (AZD0530) ou des contrôles (DMSO seul ou contrôles tampon pH 3,0) sont incubées avec 15 μL d'enzyme plus substrat peptidique/protéique pendant 5 min avant que la réaction ne soit initiée par l'ajout de 10 μL de 20 mM Mg-ATP. Pour toutes les enzymes, la concentration finale est approximée à la constante de Michaelis (K_m). Les essais sont réalisés pendant 30 min à température ambiante avant l'arrêt par l'ajout de 5 μL d'acide orthophosphorique. Après mélange, le contenu des puits est recueilli sur une plaque P81 Unifilter, en utilisant de l'acide orthophosphorique comme tampon de lavage. L'IC50 est ensuite calculée.

• Lignées cellulaires

  PC3, DU145, CWR22Rv1, LNCaP, LAPC-4, PZ-HPV7 and RWPE-1 cells

• Concentrations

  62.5 nM - 16 mM

• Temps dincubation

  1, 3 and 5 days

• Méthode

  After seeding cells at a density of 2×10³ in 96-well plates and incubating overnight, Saracatinib (AZD0530) (62.5 nM-16 mM) is added. After 1, 3 and 5 days, culture medium is removed followed by addition of 0.2 mL DMSO per well and continuous shaking of plates at 200 rotations per minute for 15min. Then IC50 is measured by MTT metho

• Modèles animaux

  CB17 mice are implanted with DU145 cells.

• Posologies

  25 mg/kg

• Administration

  Orally administered daily