Apatinib (YN968D1) mesylate

Apatinib (YN968D1) est un nouvel inhibiteur sélectif, biodisponible par voie orale, doté d'activités antiangiogéniques et antinéoplasiques potentielles. L'Apatinib se lie sélectivement au VEGFR2 et l'inhibe. L'Apatinib peut également supprimer puissamment les activités de Ret, c-kit et c-src avec des IC50 de 0,013 μM, 0,429 μM et 0,53 μM, respectivement. L'Apatinib inhibe la phosphorylation cellulaire du VEGFR-2, de c-kit et de PDGFRβ. L'Apatinib inhibe significativement la prolifération stimulée par 20 ng/mL de VEGF (IC50 = 0,17μM). L'Apatinib inhibe efficacement la prolifération, la migration et la formation de tubes des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine induites par le FBS, et bloque le bourgeonnement de l'anneau aortique de rat. [1] L'Apatinib inverse la MDR médiée par ABCB1 et ABCG2 en inhibant leur fonction de transport, mais pas en bloquant la voie AKT ou ERK1/2 ou en régulant à la baisse l'expression d'ABCB1 ou d'ABCG2. L'Apatinib potentialise significativement la cytotoxicité des substrats établis d'ABCB1 et d'ABCG2 et a augmenté l'accumulation de DOX et de Rho 123 dans les cellules surexprimant ABCB1 ou ABCG2. De plus, l'Apatinib a significativement inhibé le marquage par photoaffinité d'ABCB1 et d'ABCG2 avec du [¹²⁵I]iodoarylazidoprazosine de manière concentration-dépendante. [2]

Apatinib inhibe la croissance d'un large éventail de xénogreffes tumorales humaines de manière significative et dose-dépendante. [1] Apatinib inverse la MDR médiée par ABCB1 dans le modèle de xénogreffe de souris nues. [2] Apatinib améliore significativement l'activité antitumorale de la doxorubicine chez les souris nues porteuses de xénogreffes K562/ADR. [3]

• Test immuno-enzymatique

  Un copolymère aléatoire poly(glu, ala, tyr) 6:3:1 est utilisé comme solution de substrat contenant de la tyrosine. Le substrat est stocké sous forme de solution mère à 1 mg/mL dans du PBS à -20 °C et dilué 1 sur 500 avec du PBS afin de recouvrir des plaques à 96 puits (100 μL/puits). Les plaques sont recouvertes la veille du dosage, scellées avec des films adhésifs et stockées pendant la nuit à 4 °C. Le jour du dosage, la solution de substrat est éliminée et les puits de la plaque de dosage sont lavés une fois avec du PBST (PBS contenant 0,05 % v/v de Tween 20) et une fois avec du tampon Hepes (50 mM, pH 7,4). Les composés testés sont dilués avec de l'eau désionisée à 10 % de DMSO et 25 μL sont transférés dans les puits des plaques de dosage lavées. Une solution de chlorure de manganèse (40 mM) contenant 8 μM d'ATP est ensuite ajoutée (25 μL) à tous les puits de test. Des puits de contrôle et des puits témoins, contenant du diluant de composé et une solution de chlorure de manganèse avec et sans ATP, respectivement, sont également inclus pour déterminer la plage dynamique du dosage. L'enzyme fraîchement diluée (50 μL) est ajoutée à chaque puits, et les plaques sont incubées à température ambiante pendant 20 min. Le liquide est ensuite éliminé et les puits sont lavés deux fois avec du PBST. Un anticorps anti-phosphotyrosine de souris IgG dilué 1:6000 avec du PBST contenant 0,5 % (p/v) d'albumine de sérum bovin (BSA) est ajouté (100 μL/puits), et les plaques sont incubées pendant 1h à température ambiante avant d'éliminer le liquide et de laver les puits deux fois avec du PBST. Un anticorps anti-Ig de mouton lié à la peroxydase de raifort (HRP) dilué 1:500 avec du PBST contenant 0,5 % (p/v) de BSA, est ensuite ajouté (100 μL/puits) et les plaques sont incubées pendant 1h supplémentaire à température ambiante avant d'éliminer le liquide et de laver les puits deux fois avec du PBST. Une solution à 1 mg/mL d'acide 2,2'-azino-bis(3-éthylbenzthiazoline-6-sulfonique est fraîchement préparée dans un tampon phosphate-citrate (50 mM, pH 5,0) contenant 0,03 % (p/v) de perborate de sodium, et 100 μL sont ajoutés à chaque puits. Les plaques sont ensuite incubées pendant 20 à 60 min à température ambiante jusqu'à ce que la valeur de densité optique des puits de contrôle mesurée à 405 nm soit approximativement de 1,0. Les valeurs IC50 pour l'inhibition enzymatique des composés sont interpolées à l'aide de Microcal Origin après soustraction des valeurs témoins.

• Lignées cellulaires

  HUVEC

• Concentrations

  ~25 μM

• Temps dincubation

  72 h

• Méthode

  The HUVEC are seeded into 96-well plates. After 24 h of incubation, cells are exposed to the test agents (vehicle as control) together with 20 ng/mL VEGF or 20% FBS for another 72 h. After fixation with 10% trichloroacetic acid, the cells are stained with 0.4% sulforhodamine B for 30 min at 37 °C and then washed with 1% acetic acid. Tris is added to dissolve the complex, and the optical density is measured at 520 n

• Modèles animaux

  Ls174t, HCT 116, SGC-7901, HT-29, A549, NCI-H460 xenografted BALB/cA nude mice

• Posologies

  50, 100, 200 mg/kg

• Administration

  p.o.