Dactolisib (BEZ235)

N° de catalogueS1009 Lot :S100917

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Données techniques

Formule

C30H23N5O
Poids moléculaire 469.55 Numéro CAS 915019-65-7
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 4 mg/mL (8.51 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Le Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ235) est un double inhibiteur compétitif de l'ATP des PI3K et mTOR pour p110α/γ/δ/β et mTOR(p70S6K) avec une IC50 de 4 nM /5 nM /7 nM /75 nM /6 nM dans les essais sans cellules, respectivement. Il inhibe l'ATR avec une IC50 de 21 nM dans les cellules 3T3TopBP1-ER, induit l'autophagie et supprime la réplication du VIH-1. Phase 2.
Cibles
p110α
(Cell-free assay)		 p110γ
(Cell-free assay)		 mTOR (p70S6K)
(Cell-free assay)		 p110δ
(Cell-free assay)		 ATR
(3T3TopBP1-ER cells)		 Voir plus
4 nM 5 nM 6 nM 7 nM 21 nM
In vitro Le Dactolisib (BEZ235) réduit significativement les niveaux de phosphorylation de la kinase activée par mTOR p70S6K. Il en résulte une réduction des niveaux de S235/S236P-RPS6 avec une IC50 de 6,5 nM. L'activité de ce composé contre mTOR est déterminée à l'aide d'un essai biochimique mTOR K-LISA avec une IC50 de 20,7 nM. Il montre une activité légèrement inférieure contre son paralogue β avec une IC50 de 75 nM. La voie PI3K/Akt/mTOR est souvent activée constitutivement dans les cellules tumorales humaines. Le BEZ235 bloque l'activité kinase de PI3K et mTOR en se liant à la fente de liaison de l'ATP de ces enzymes. Les deux lignées cellulaires PTEN-null, PC3M et U87MG, montrent une réduction dose-dépendante de la prolifération cellulaire lorsqu'elles sont traitées avec des concentrations croissantes de ce composé avec une GI50 moyenne de 10-12 nM. C'est un inhibiteur catalytique de mTORC1/2.
In vivo Le Dactolisib (BEZ235) induit la régression des tumeurs (69 %) sans effet statistiquement significatif sur la prise de poids corporel. Globalement, ces résultats préliminaires d'efficacité in vivo montrent qu'il provoque une stase de la maladie lorsqu'il est administré par voie orale en tant qu'agent unique et qu'il peut améliorer l'efficacité d'autres agents anticancéreux lorsqu'il est utilisé dans des études combinées.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Dosages in vitro de la protéine kinase, PI3K et mTOR

    Les protéines PI3Kα, β et δ sont composées du domaine iSH2 de p85 fusionné à l'extrémité NH2 de la protéine p110 pleine longueur, à l'exception de l'α qui ne contient pas non plus les 20 derniers acides aminés. PI3Kγ est produite comme protéine pleine longueur délétée de ses 144 premiers acides aminés. Tous les constructions sont fusionnées à une étiquette His COOH-terminale pour une purification aisée, puis clonées dans les plasmides pBlue-Bac4.5 (pour les isoformes α, β et δ) ou pVL1393 (pour l'isoforme γ). Les différents vecteurs sont ensuite cotransfectés avec de l'ADN génomique BaculoGold WT en utilisant des méthodes recommandées par le fournisseur pour la production des baculovirus et protéines recombinants respectifs. Le Dactolisib (BEZ235) est testé pour son activité contre PI3K à l'aide d'un dosage Kinase-Glo. La réaction de la kinase est effectuée dans une plaque noire de 384 puits. Chaque puits est chargé avec 50 μL d'éléments d'essai (dans 90 % de DMSO) et 5 μL de tampon de réaction contenant 10 μg/mL de substrat PI (l-α-phosphatidylinositol ; Avanti Polar Lipids ; préparé dans 3 % d'octyl-glucoside) et les protéines PI3K (10, 25, 10 et 150 nM de p110α, p110β, p110δ et p110γ, respectivement) sont ensuite ajoutées. La réaction est initiée par l'ajout de 5 μL d'ATP 1 μM préparé dans le tampon de réaction et est incubée pendant 60 (pour p110α, p110β et p110δ) ou 120 min (pour p110γ). Elle est terminée par l'ajout de 10 μL de tampon Kinase-Glo. Les plaques sont ensuite lues dans un lecteur Synergy 2 pour la détection de la luminescence.
Test cellulaire :

[2]
  • Lignées cellulaires

    HCT116, DLD-1 and SW480 cells

  • Concentrations

    0-1 μM

  • Temps dincubation

    48 hours

  • Méthode

    The human CRC cell lines, HCT116 (PIK3CA mutant; kinase domain at H1047R), DLD-1 (PIK3CA mutant; helical domain at E545K), and SW480 (PIK3CA wild-type) and isogenic DLD-1 PIK3CA mutant as well as wild-type cells are maintained in DMEM with 10% FBS and 1 × Penicillin/Streptomycin. Cells are plated at different initial densities (HCT116: 3 × 103 cells/well, DLD-1: 5.5 × 103 cells/well, SW480: 4.5 × 103 cells/well, DLD-1 PIK3CA mutant: 7 × 103 cells/well, and DLD-1 PIK3CA wild-type: 9 × 103 cells/well) to account for differential growth kinetics. After 16 hours, cells are incubated with increasing concentrations of Dactolisib (BEZ235), and the drug-containing growth medium is changed every 24 hours. Cell viability is assessed 16 hours after the initial plating and 48 hours after initiation of treatment with this compound using the colorimetric MTS assay CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, as per the manufacturer's instructions. Cell viability after drug treatment is normalized to that of untreated cells also grown for 48 hours. For western blot analysis, cells are plated with zero or maximum inhibitory dose (500 nM) of it for 2, 6, 24, or 48 hours.
Étude animale :

[1]
  • Modèles animaux

    Female Harlan athymic nude mice

  • Posologies

    45 mg/kg

  • Administration

    p.o.

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18606717/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21966435/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21791089/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20606035/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21412767/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22662154/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20876803/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21552262/

Validation du produit par le client

<p>Three-dimensional responses of MCF7/IGF-1R cells to TAM (1 μM), E2 and IGF-1. Compared to parental MCF7 cells (a), MCF7/IGF-1R cells (b) in three-dimensional (3D) culture formed bigger acini in response to IGF-1 stimulation and displayed significant TAM resistance when treated with TAM (1 μM) + E2 + IGF-1, which was removable by kinase inhibitors BMS-536924, U0126 and BEZ235 (c). Cells (10,000/well) were seeded in 96-well plates. Acini were formed on 100% Matrigel and cultured for 14 days in starving medium containing 2% Matrigel and 5% charcoal/dextran-stripped fetal bovine serum with the treatments as indicated. Concentrations used: TAM (1 μM), E2 (1 nM) and IGF-1 (100 ng/mL). Confocal image original magnification, × 20. Red, rhodamine phalloidin (actin). Blue, Hoechst blue stain. Results are representative of two individual experiments.</p>

Données de [ Breast Cancer Res , 2011 , 13, R52 ]

<p>TAM (10 nM) agonistic behavior in MCF7/IGF-1R cells is not inhibited by phosphatidylinositol 3-kinase/Akt inhibitor BEZ235. (a) Inhibitory effects of kinase inhibitors BMS-536924, U0126 and BEZ235 on agonistic effect of TAM (10 nM) in the presence of IGF-1 (100 ng/mL). **P < 0.01. (b) Inhibitory effects of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt inhibitor BEZ235 at various dose ranges on IGF-1R signaling. (c) Agonistic behavior of TAM (10 nM) in response to BEZ235 kinase inhibitor. (-), no BEZ235. Results are representative of three independent experiments. Data are expressed as means ± SD.</p>

Données de [ Breast Cancer Res , 2011 , 13:R52 ]

<p>A, ANOVA of IC50 values of the dual PI3K/mTOR inhibitor NVP-BEZ235 in 23 melanoma cell lines showing no significant difference in sensitivity to this compound in B-Raf mutant and Braf wild-type cells. B, decreases in pAkt and pP70S6K in a dose and time-dependent fashion in 2 melanoma cell lines treated with NVP-BEZ235. pP70S6K levels are undetectable at all concentrations and time points studied, whereas levels of pAkt start rising again after 4 hours of drug exposure in a dose-dependent fashion. C, clonogenic assays in 2 melanoma cell lines (YUVON and YUSIK) treated with NVP-BEZ235 at different concentrations. NVPBEZ235 was effective in inhibiting colony formation at low nanomolar concentrations.</p>

Données de [ Clin Cancer Res , 2010 , 16, 6029-6039 ]

<p>Relative kinase activities of p110α mutants and the inhibitory effect of PI3K inhibitors against hotspot mutants of p110α. A, recombinant FLAG-tagged PI3K p110α/p85α protein complex produced in 293T cells was immunoprecipitated , and the immunoprecipitates were used for the quantitative PI3K-HTRF assay (32).</p><div><div>B, effect of three PI3K inhibitors (ZSTK474, LY294002, and NVP-BEZ235) on the enzymatic activity of two hotspot mutants (E545K and H1047R) p110α compared with the wild-type. No striking difference was observed in the IC50 concentrations of these inhibitors between wild-type and mutant p110α.</div><div> </div></div><p> </p>

Données de [ Cancer Res , 2010 , 70, 4982-4994 ]

Sellecks Dactolisib (BEZ235) A été cité par 519 Publications

Neuroimmune Microenvironment Reprogramming via Immuno-piezoelectric Transducers for Synergistic Stem Cell Therapy in Traumatic Brain Injury [ Adv Mater, 2025, e12810.] PubMed: 41030193
Ataluren improves hematopoietic and pancreatic disorders in Shwachman-Diamond syndrome patients: a compassionate program case-series [ Nat Commun, 2025, 16(1):8189] PubMed: 40897730
TIGIT deficiency promotes autoreactive CD4+ T-cell responses through a metabolic‒epigenetic mechanism in autoimmune myositis [ Nat Commun, 2025, 16(1):4502] PubMed: 40374622
Spatial covariance reveals isothiocyanate natural products adjust redox stress to restore function in alpha-1-antitrypsin deficiency [ Cell Rep Med, 2025, 6(1):101917] PubMed: 39809267
Heterogeneous Activation of Signaling Pathways and Therapeutic Vulnerabilities in KSHV-Associated Primary Effusion Lymphoma Cell Lines [ J Med Virol, 2025, 97(8):e70534] PubMed: 40751690
Macrophage CCL7 promotes resistance to immunotherapy for colorectal cancer by regulating the infiltration of macrophages and CD8+ T cells [ J Immunother Cancer, 2025, 13(11)e013027] PubMed: 41290259
YAP1 promoter-associated noncoding RNA affects Ewing sarcoma cell tumorigenicity by regulating YAP1 expression [ Cell Mol Biol Lett, 2025, 30(1):63] PubMed: 40414844
Perilipin2-dependent lipid droplets accumulation promotes metastasis of oral squamous cell carcinoma via epithelial-mesenchymal transition [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):30] PubMed: 39875372
Depleting the action of EZH2 through PI3K-mTOR inhibition to overcome metastasis and immunotherapy resistance in triple-negative breast cancer [ Mol Cancer Ther, 2025, 10.1158/1535-7163.MCT-24-0693] PubMed: 40497697
Changes in Melanoma Cell Morphology Following Inhibition of Cell Invasion by Third-Generation mTOR Kinase Inhibitors [ Int J Mol Sci, 2025, 26(16)7770] PubMed: 40869090

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