Daclatasvir (BMS-790052)

N° de catalogueS1482 Lot :S148202

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Données techniques

Formule

C40H50N8O6
Poids moléculaire 738.88 Numéro CAS 1009119-64-5
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 148 mg/mL (200.3 mM)
Ethanol 148 mg/mL (200.3 mM)
Water Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Le Daclatasvir (BMS-790052, EBP883) est un inhibiteur hautement sélectif de l'HCV NS5A avec une EC50 de 9 à 50 pM, pour une large gamme de génotypes de réplicons du VHC et le virus infectieux JFH-1 de génotype 2a en culture cellulaire. Phase 3.
Cibles
HCV NS5A
9 pM-50 pM(EC50)
In vitro Daclatasvir (BMS-790052) est l'un des inhibiteurs les plus puissants de la réplication du VHC rapportés à ce jour. Les valeurs moyennes de EC50 de ce composé sont de 50 et 9 pM pour les réplicons de génotype 1a et 1b du VHC, respectivement. Il présente un indice thérapeutique (CC50/EC50) d'au moins 105 et est inactif envers un panel de 10 virus à ARN et à ADN, avec une EC50 supérieure à 10 μM. Cela confirme sa spécificité pour le VHC. Dans les cellules Huh7 hébergeant les réplicons du VHC de génotype 1b, il bloque la réplication du génome du VHC, qu'elle soit transitoire ou stable, avec des valeurs de EC50 allant de 1 à 15 pM. À des concentrations de 100 pM ou 1 nM, il a été démontré qu'il modifie la localisation subcellulaire et le fractionnement biochimique de NS5A. Ce composé inhibe les réplicons hybrides contenant les gènes NS5A du génotype 4 du VHC avec une EC50 de 7 à 13 pM. Le résidu 30 de NS5A est un site important pour la résistance médiée par le BMS-790052 dans les réplicons hybrides.
Caractéristiques Inhibiteur de première classe, hautement sélectif de la NS5A du virus de l'hépatite C (VHC) avec des valeurs de EC50 picomolaires.

Protocole (de référence)

Test kinase :[4]
  • Essai FRET pour les inhibiteurs de HCV NS5A

    Ce peptide (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS]-Glu-Glu-Abu-[COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL]-NH2) contient un donneur fluorescent {EDANS, acide 5-[(2-aminoéthyl)amino]naphtalène-1-sulfonique} près d'une de ses extrémités et un accepteur {DABCYL, acide 4-[(4-diméthylamino)phényl]azo}benzoïque} près de l'autre extrémité. Le transfert d'énergie de résonance intermoléculaire entre le donneur et l'accepteur éteint la fluorescence du peptide, mais à mesure que la Proteases NS3 clive le peptide, les produits sont libérés de l'extinction par transfert d'énergie de résonance. La fluorescence du donneur augmente avec le temps à mesure que davantage de substrat est clivé par la Proteases NS3. Les réactifs de détection sont : le réactif de lyse de culture cellulaire de luciférase 5× dilué dans dH2O à 1×, avec addition de NaCl (150 mM) et de peptide FRET (20 μM). Les cellules HCV-Huh-7 ont été placées dans des plaques à 96 puits et laissées adhérer pendant la nuit (1×104 cellules par puits). Le lendemain, le Daclatasvir (BMS-790052) a été ajouté aux puits et les plaques ont été incubées pendant 72 heures. Les plaques ont ensuite été rincées avec du PBS et le dosage FRET a été effectué en ajoutant 30 μL du réactif de détection de peptide FRET mentionné ci-dessus à chaque puits. Les signaux ont été acquis à l'aide d'un instrument Cytofluor 4000, réglé en mode automatique à 340 nm (excitation)/490 nm (émission), fonctionnant pendant 20 cycles ou moins, et en lisant les plaques en mode cinétique. Après le dosage FRET, 40 μL de substrat de luciférase ont été ajoutés à chaque puits et l'activité de la luciférase a été mesurée.
Test cellulaire :[1]
  • Lignées cellulaires

    HCV replicon cells (Huh7)

  • Concentrations

    0.1 pM - 50 μM, dissolved in DMSO (the final concentration of DMSO is 0.5%)

  • Temps dincubation

    72 hours

  • Méthode

    Daclatasvir (BMS-790052) is added to 96-well plates containing HCV replicon cells seeded approximately 12 hours before in 200 µL media. The cell plates are tested for replication activity and cytotoxicity after 72 hours of incubation. Cytotoxicity is measured with CellTiter-Blue, after which the media and dye are removed, plates are inverted and the remaining liquid is blotted with paper towels. Replication activity of the HCV genotype 1a cell lines is quantified using Renilla luciferase. 1× Renilla luciferase lysis buffer (30 µL) is added to each well and plates are incubated with gentle shaking for 15 min. Renilla luciferase substrate (40 µL) is then added and the signals are detected using a Top Count luminometer set for light emission quantification. One hundred per cent activity is calculated for each cell line for the DMSO-only wells; percentage activity is calculated for each concentration of the inhibitor by dividing the average value for wells containing this compound by the average value for wells containing DMSO.

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20410884/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21513964/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22203595/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15793110/

Validation du produit par le client

<p>The toxicity of BMS-790052 (BMS) and Telaprevir (TPV) was measured by seeding 96-well plates to 70% confluence and exposing the cells to up to 50 μM of compound for 72 hours. MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was added to each well at a final concentration of 500 μg/ml 4 h before dissolving crystals in 100 μl of DMSO and measuring at 550 nm UV wavelengths. The 50% cytotoxic concentration (CC50) was then calculation using the OD550 value and the following formula: log CC50=log concentration of HPP-[(HPP-50)/(HPP-LPP)×log d HPP: highest protective percentage closest to 50% LPP: Lowest protective percentage closest to 50% d: dilution factor</p>

, 2011 , Dr. Julie Sheldon,Dr Esteban Domingo and Dr Celia Perales

<p>Huh7.5 cells were infected with JFH-1 (2a) strain. Once the cells reached 80% infectivity they were treated with pMconcentration of BMS790052 for two different time points. Cells were collected in SDS sample loading buffer and probed for NS5A and GAPDH. After 16hrs hyperphosphorylated NS5A disappeared with increasing concentration of the drug. 40hrs of treatment resulted complete disappearance of NS5A. GAPDH is internal control.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

<p>80% infected HCV JFH-1 cells were treated with several concentrations of BMS790052 in pMrange. Cells were fixed after 16hrs and NS5A was probed.Cells treated with BMS790052 shows NS5A present in clusters compared to an even cytoplasmic distribution in untreated cells.</p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

Sensitivity of PR63cc to the combinatory treatment with asunaprevir and daclatasvir. Huh7.5.1 cells infected with PR63cc or JFH1 at an MOI of 0.05 for 3 days were treated with either asunaprevir, daclatasvir or in combination for another 3 days. 40 nM asunaprevir and 0.05 nM daclatasvir, approximately the EC50 concentration of the each inhibitor for JFH1, were used. The antiviral efficiency of each compound was evaluated by quantifying the intracellular HCV RNA by RT-qPCR. Data were expressed as the percentage of mock treatment control. The error bars were calculated from two independent experiments. ns, P > 0.05. *, P < 0.05.

Données de [ , , Antiviral Res, 2017, 139:18-24 ]

Sellecks Daclatasvir (BMS-790052) A été cité par 58 Publications

Rapid hepatitis C virus replication machinery removal after antiviral treatment with DAA monitored by multimodal imaging [ Structure, 2025, S0969-2126(25)00193-5] PubMed: 40553718
Hepatitis C virus-induced differential transcriptional traits in host cells after persistent infection elimination by direct-acting antivirals in cell culture [ J Med Virol, 2024, 96(7):e29787] PubMed: 38988177
Antiviral drugs prolong survival in murine recessive dystrophic epidermolysis bullosa [ EMBO Mol Med, 2024, 16(4):870-884] PubMed: 38462666
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Unraveling the dynamics of hepatitis C virus adaptive mutations and their impact on antiviral responses in primary human hepatocytes [ J Virol, 2024, e0192123.] PubMed: 38319104
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
Hepatitis C virus cell culture adaptive mutations enhance cell culture propagation by multiple mechanisms but boost antiviral responses in primary human hepatocytes [ bioRxiv, 2023, 2023.11.22.568224] PubMed: 38045248
Combination of antiviral drugs inhibits SARS-CoV-2 polymerase and exonuclease and demonstrates COVID-19 therapeutic potential in viral cell culture [ Commun Biol, 2022, 5(1):154] PubMed: 35194144
Going Viral: An Investigation into the Chameleonic Behaviour of Antiviral Compounds [ Chemistry, 2022, e202202798.] PubMed: 36286339
Correlation of hepatitis C virus-mediated endoplasmic reticulum stress with autophagic flux impairment and hepatocarcinogenesis [ Med Mol Morphol, 2021, 10.1007/s00795-020-00271-5] PubMed: 33386512

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