SKI-606 (Bosutinib)

Le Bosutinib est sélectif pour Src par rapport aux kinases non-Src, avec une IC50 de 1,2 nM, et inhibe puissamment la prolifération cellulaire dépendante de Src avec une IC50 de 100 nM. [1] Ce composé inhibe significativement la prolifération des lignées cellulaires leucémiques Bcr-Abl-positives KU812, K562 et MEG-01 mais pas Molt-4, HL-60, Ramos et d'autres lignées cellulaires leucémiques, avec des IC50 de 5 nM, 20 nM et 20 nM respectivement, plus puissamment que celle du STI-571. Similaire au STI-571, il présente une activité antiproliférative contre les fibroblastes transformés par Abl-MLV avec une IC50 de 90 nM. Ce produit chimique ablates la phosphorylation de la tyrosine de Bcr-Abl et STAT5 dans les cellules LMC et de v-Abl exprimé dans les fibroblastes à la concentration de ~50 nM, 10-25 nM et 200 nM respectivement, conduisant à l'inhibition de la signalisation en aval de Bcr-Abl de la phosphorylation de Lyn/Hck. [2] Bien qu'incapable d'inhiber la prolifération et la survie des cellules cancéreuses du sein, il diminue significativement la motilité et l'invasion des cellules cancéreuses du sein avec une IC50 d'environ 250 nM, impliquant une augmentation de l'adhésion cellule-cellule et de la localisation membranaire de la β-caténine. [3]

Le Bosutinib (60 mg/kg/jour) est actif contre les xénogreffes de fibroblastes transformés par Src et les xénogreffes HT29 chez des souris nues avec des T/C de 18 % et 30 % respectivement. [1] L'administration orale de ce composé pendant 5 jours supprime significativement la croissance tumorale K562 chez les souris de manière dose-dépendante, les grosses tumeurs étant éradiquées à une dose de 100 mg/kg et les souris étant exemptes de tumeurs à 150 mg/kg sans toxicité manifeste. [2] Étant inactif contre les xénogreffes Colo205 chez les souris nues à 50 mg/kg deux fois par jour, l'administration de ce produit chimique à 75 mg/kg deux fois par jour est nécessaire contre les xénogreffes Colo205, et l'augmentation de la dose de ce composé n'apporte aucun bénéfice supplémentaire, contrairement à la capacité dose-dépendante significative contre les xénogreffes HT29. [4]

• Les essais kinases Src et Abl

  L'activité de la kinase Src est mesurée par ELISA. Src (3 unités/réaction), le tampon de réaction (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 0,1 mM EGTA, 0,5 mM Na₃VO₄) et le peptide substrat cdc2 sont ajoutés à diverses concentrations de Bosutinib et incubés à 30 °C pendant 10 minutes. La réaction est démarrée par l'ajout d'ATP à une concentration finale de 100 μM, incubée à 30 °C pendant 1 heure et arrêtée par l'ajout d'EDTA. Les instructions du fabricant sont suivies pour les étapes ultérieures. L'essai de la kinase Abl est réalisé dans un format de détection DELFIA en phase solide à base d'europium. Le peptide biotinylé (2 μM) est lié à des plaques de microtitration revêtues de streptavidine pendant 1,5 heure dans 1 mg/mL d'ovalbumine dans du PBS. Les plaques sont lavées pendant 1 heure avec du PBS/0,1 % Tween 80, suivi d'un lavage au PBS. La réaction de la kinase est incubée pendant 1 heure à 30°C. La kinase Abl (10 unités) est mélangée avec 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 80 μM EGTA, 100 μM ATP, 0,5 mM Na₃VO₄, 1 % DMSO, 1 mM HEPES (pH 7,0), 200 μg/mL d'ovalbumine et diverses concentrations de ce composé. La réaction est arrêtée avec de l'EDTA à une concentration finale de 50 mM. La réaction est surveillée avec un anticorps anti-phosphotyrosine marqué à l'Europium et une solution d'amélioration DELFIA.

• Lignées cellulaires

  Abl-MLV, Rat 2, KU812, K562, and MEG-01 cells

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cells are exposed to various concentrations of Bosutinib for 72 hours. Anchorage-independent proliferation of Abl-MLV-transformed fibroblasts is measured in 96-well ultra-low binding plates treated with Sigmacote to block residual cell attachment. Cell proliferation is measured with MTS or Cell-Glo. For the determination of cell cycle or cell death, cells are prepared for FACS analysis in the CycleTest Plus DNA reagent kit and analyzed on a fluorescence-activated cell sorter flow cytometer.

• Modèles animaux

  Nude female mice injected with K562 cells

• Posologies

  ~150 mg/kg/day

• Administration

  Oral gavage