Dovitinib (TKI-258)

Dovitinib (TKI-258) inhibe puissamment la croissance stimulée par le FGF des cellules B9 exprimant WT et F384L-FGFR3 avec une IC50 de 25 nM. De plus, il inhibe la prolifération des cellules B9 exprimant chacune des diverses mutations activées de FGFR3. Fait intéressant, des différences minimales sont observées dans la sensibilité des différentes mutations de FGFR3 à ce composé, avec une IC50 allant de 70 à 90 nM pour chacune des diverses mutations. Les cellules B9 dépendantes de l'IL-6 contenant uniquement le vecteur (cellules B9-MINV) sont résistantes à son activité inhibitrice à des concentrations allant jusqu'à 1 µM. Il inhibe la prolifération cellulaire des cellules KMS11 (FGFR3-Y373C), OPM2 (FGFR3-K650E) et KMS18 (FGFR3-G384D) avec une IC50 de 90 nM (KMS11 et OPM2) et 550 nM, respectivement. Le composé inhibe la phosphorylation d'ERK1/2 médiée par le FGF et induit une cytotoxicité dans les cellules MM primaires exprimant FGFR3. Les BMSC confèrent un degré modeste de résistance avec une inhibition de croissance de 44,6 % pour les cellules traitées avec 500 nM de Dovitinib et cultivées sur stroma, comparativement à une inhibition de croissance de 71,6 % pour les cellules cultivées sans BMSC. Il inhibe la prolifération de M-NFS-60, une lignée cellulaire myéloblastique de souris dont la croissance est stimulée par le M-CSF, avec une concentration efficace médiane (EC50) de 220 nM. [1] Le traitement des cellules SK-HEP1 avec ce composé entraîne une réduction dose-dépendante du nombre de cellules et un arrêt en phase G2/M avec une réduction des phases G0/G1 et S, une inhibition de la croissance indépendante de l'ancrage et un blocage de la motilité cellulaire induite par le bFGF. L'IC50 pour ce composé dans les cellules SK-HEP1 est d'environ 1,7 µM. Il réduit également significativement les niveaux de phosphorylation basaux de FGFR-1, du substrat 2α de FGFR (FRS2-α) et d'ERK1/2, mais pas d'Akt, dans les cellules SK-HEP1 et 21-0208. Dans les cellules HCC 21-0208, il inhibe significativement la phosphorylation de FGFR-1, FRS2-α, ERK1/2 induite par le bFGF, mais pas d'Akt. [2]

Dovitinib (TKI-258) induit des réponses à la fois cytostatiques et cytotoxiques in vivo, entraînant la régression des tumeurs exprimant FGFR3.[1] Il montre une inhibition dose-dépendante et exposition-dépendante des récepteurs tyrosine kinases (RTK) cibles exprimés dans les xénogreffes tumorales. Ce composé inhibe puissamment la croissance tumorale de six lignées de CHC. L'inhibition de l'Angiogenesis est corrélée à l'inactivation des voies de signalisation FGFR/PDGFRβ/VEGFR2. Dans un modèle orthotopique, il inhibe puissamment la croissance tumorale primaire et les métastases pulmonaires et prolonge significativement la survie des souris. [2] L'administration de Dovitinib entraîne une inhibition significative de la croissance tumorale et des régressions tumorales, y compris des tumeurs grandes et établies (500-1 000 mm³). [3]

• Essais kinases in vitro

  Les valeurs de concentration inhibitrice de 50 % (IC50) pour l'inhibition des RTK par Dovitinib (TKI-258) sont déterminées dans un format de fluorescence résolue dans le temps (TRF) ou radioactif, mesurant son inhibition du transfert de phosphate vers un substrat par l'enzyme respective. Les domaines kinase de FGFR3, FGFR1, PDGFRβ et VEGFR1-3 sont testés dans 50 mM HEPES (acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N′-2-éthanesulfonique), pH 7,0, 2 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM NaF, 1 mM dithiothréitol (DTT), 1 mg/mL d'albumine sérique bovine (BSA), 0,25 μM de substrat peptidique biotinylé (GGGGQDGKDYIVLPI) et 1 à 30 μM d'adénosine triphosphate (ATP) selon le K_m de l'enzyme respective. Les concentrations d'ATP sont égales ou légèrement inférieures au K_m. Pour les réactions c-KIT et FLT3, le pH est augmenté à 7,5 avec 0,2 à 8 μM d'ATP en présence de 0,25 à 1 μM de substrat peptidique biotinylé (GGLFDDPSYVNVQNL). Les réactions sont incubées à température ambiante pendant 1 à 4 heures et le peptide phosphorylé est capturé sur des plaques de microtitration recouvertes de streptavidine contenant un tampon d'arrêt de réaction (25 mM EDTA [acide éthylènediaminetétraacétique], 50 mM HEPES, pH 7,5). Le peptide phosphorylé est mesuré avec le système DELFIA TRF utilisant un anticorps anti-phosphotyrosine PT66 marqué à l'europium. La concentration de ce composé pour l'IC50 est calculée à l'aide d'une régression non linéaire avec le logiciel d'analyse de données XL-Fit version 4.1 (IDBS). L'inhibition de l'activité kinase du récepteur du facteur stimulant les colonies-1 (CSF-1R), PDGFRα, du récepteur de l'insuline (InsR) et du récepteur du facteur de croissance analogue à l'insuline 1 (IGFR1) est déterminée à des concentrations d'ATP proches du K_m pour l'ATP.

• Lignées cellulaires

  B9 cells, MM cell lines

• Concentrations

  100 nM

• Temps dincubation

  48-96 hours

• Méthode

  Cell viability is assessed by 3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyl tetrazolium (MTT) dye absorbance. Cells are seeded in 96-well plates at a density of 5 × 10³ (B9 cells) or 2 × 10⁴ (MM cell lines) cells per well. Cells are incubated with 30 ng/mL aFGF and 100 μg/mL heparin or 1% IL-6 where indicated and increasing concentrations of Dovitinib (TKI-258). For each concentration of this compound, 10 μL aliquots of drug or DMSO diluted in culture medium is added. To evaluate its effect on growth of MM cells adherent to BMSCs, 10⁴ KMS11 cells are cultured on BMSC-coated 96-well plates in the presence or absence of it. Plates are incubated for 48 to 96 hours. For assessment of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF)-mediated growth, 5 × 10³ M-NFS-60 cells/well are incubated with serial dilutions of it with 10 ng/mL M-CSF and without granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF). After 72 hours cell viability is determined using Cell Titer-Glo Assay. Each experimental condition is performed in triplicate.

• Modèles animaux

  8-week-old female BNX mice bearing KMS11 cells

• Posologies

  10, 30, or 60 mg/kg

• Administration

  Gavage