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In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble. * Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre. * Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)
Préparation des solutions mères
Activité biologique
Description
Tosedostat (CHR2797) est un inhibiteur d'aminopeptidase pour LAP, PuSA et Aminopeptidase N avec des IC50 de 100 nM, 150 nM et 220 nM, respectivement, et n'inhibe pas efficacement PILSAP, MetAP-2, LTA4 hydrolase ou MetAP-2. Phase 2.
Cibles
LAP
PuSA
Aminopeptidase N
100 nM
150 nM
220 nM
In vitro
Le CHR-2797 n'a presque aucun effet sur l'activité de l'Aminopeptidase B, du PILSAP, de l'LTA4 hydrolase et du MetAP-2 avec des valeurs d'IC50 >1 uM, >5 uM, >10 uM et >30 uM, respectivement. Le CHR-2797 est converti en un produit acide pharmacologiquement actif (CHR-79888) à l'intérieur des cellules, qui montre une activité inhibitrice significative envers l'LTA4 hydrolase avec un IC50 de 8 nM. Le CHR-2797 présente de profonds effets anti-prolifératifs contre un éventail de lignées de cellules cancéreuses telles que U-937, HL-60, KG-1 et GDM-1 avec des valeurs d'IC50 de 10 nM, 30 nM, 15 nM et 15 nM, respectivement, mais est inactif contre HuT 78 et Jurkat E6-1 avec des valeurs d'IC50 >10 uM. Il n'y a pas de corrélation évidente entre la sensibilité au CHR-2797 et le statut mutationnel de p53, PTEN ou K-Ras dans les cellules. Le CHR-2797 montre une sélectivité pour les cellules transformées (MrC5-SV2 ou K-ras NRK) par rapport aux cellules non transformées (MrC5 ou NRK). Le traitement au CHR-2797 (6 μM) entraîne la régulation à la hausse des gènes impliqués dans le transport des acides aminés et les voies métaboliques, la phosphorylation du facteur d'initiation eucaryote 2α, l'inhibition de la phosphorylation des substrats de mTOR et une synthèse protéique réduite dans les cellules HL-60.
In vivo
L'administration de CHR-2797 (~100 mg/kg) diminue le volume des tumeurs in vivo, comparativement aux contrôles, de manière dose-dépendante dans le modèle de colonisation pulmonaire rat HOSP.1, le modèle de colonisation hépatique du chondrosarcome rat HSN LV10, le modèle de métastase spontanée du cancer du sein humain MDA-MB-435 et le modèle de xénogreffe de cellules humaines MDA-MB-468.
L'activité de la LAP est déterminée en mesurant l'hydrolyse du tripeptide, LGG, qui est détectée par le réactif de dérivation OPA en présence de β-mercaptoéthanol. Le dosage est effectué dans des plaques de dosage à 96 puits. Les puits contiennent du CHR-2797 dilué (5 μL), 10 μg/mL de LAP (5 μL) et 40 μL de LGG 0,5 mM. La plaque est agitée brièvement et incubée pendant 90 minutes à 37 °C. La réaction est terminée par l'ajout de 200 μL d'OPA/β-Mercaptoéthanol par puits. La plaque est lue sur le lecteur de plaques Victor Wallac3 : excitation, 355nm et émission, 460nm. L'activité de la PuSA est déterminée en utilisant le substrat fluorogène Ala-AMC. Le mélange d'incubation contient du CHR-2797 dilué (20 μL), du substrat (125 μM Ala-AMC dans un tampon Tris-HCl 0,125 M, pH 7,5 ; 40 μL) et de l'enzyme (40 μL). Après incubation pendant 2 heures à 37 °C, la réaction est arrêtée par l'ajout de 100 μL d'acide acétique à 3 % (v/v). La fluorescence est mesurée à l'aide d'un fluorimètre SLT Fluostar. L'Aminopeptidase N est dosée à l'aide du substrat fluorogène, Ala-AMC. Le mélange d'incubation contient du CHR-2797 dilué (20 μL), du substrat (40 μL ; concentration finale, 60 μM) et de l'enzyme (40 μL, dilution 1:8000) et est incubé pendant 60 minutes à 37 °C avant l'ajout de 100 μL d'acide acétique à 3 % (v/v), pour arrêter la réaction. La fluorescence est mesurée à l'aide d'un fluorimètre SLT Fluostar.
Cells are exposed to different concentrations of CHR-2797 for 72 hours. During the final 4 hours of this incubation, cells are pulsed with 0.4 μCi/well of [3H]thymidine (specific activity, 5 mCi/mmol), harvested onto GF/C glass fiber filter mats using a Tomtec harvester, and counted on a 1450 MicroBeta scintillation counter to determine the amount of [3H]thymidine incorporated into cellular DNA. Inhibition of the proliferation of human cancer cell lines is measured by [3H]thymidine incorporation.
Female rats (CBH/cbi) injected i.v. with HOSP.1P cells, male (CBH/cbi) rats injected with HSN LV10 cells, and nude mice (MF1 (nu/nu) inoculated with MDA-MB 435 cells or MDA-MB-468 cells
Posologies
~100 mg/kg
Administration
Dosed daily p.o.
Références
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18701491/
Sellecks Tosedostat (CHR2797) A été cité par 3 Publications
Predicting effective pro-apoptotic anti-leukaemic drug combinations using co-operative dynamic BH3 profiling
[ PLoS One, 2018, 13(1):e0190682]
Response of Single Leukemic Cells to Peptidase Inhibitor Therapy Across Time and Dose Using a Microfluidic Device
[Kovarik ML ,et al. Integr Biol, 2014, 6(2):164-74]
Microfluidic chemical cytometry of peptide degradation in single drug-treated acute myeloid leukemia cells.
[Kovarik ML, et al. Anal Chem, 2013, 85(10):4991-7]
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