Chelerythrine Chloride (NSC 646662)

Le chlorure de Chélérythrine (NSC 646662) interagit avec le domaine catalytique de la PKC, est un inhibiteur compétitif par rapport à l'accepteur de phosphate (histone IIIS) avec une valeur Ki de 0,7 μM et un inhibiteur non compétitif par rapport à l'ATP. Il montre de puissants effets cytotoxiques contre les cellules L-1210 avec une IC50 de 0,53 μM. Ce composé n'altère aucune activité de la PKA, de la TPK et de la Ca/CM-PK, et son effet inhibiteur sur l'activité de la PKC ne varie pas selon les divers substrats, y compris GS, MLC, MBP et Fibrinogène. [1] Il inhibe l'activité de la PKC dans des extraits cellulaires bruts de cellules SQ-20B de manière dose-dépendante. La chélérythrine diminue la viabilité cellulaire, déterminée par le test MTT, de manière dose-dépendante dans les cellules SCC35, JSQ3, SQ20B et SCC61. [2] À 5 μM, elle supprime l'expression induite par le VEGF d'ICAM-1, VCAM-1 et E-sélectine dans les HUVEC. Elle supprime également l'activité NF-κB induite par le VEGF dans les HUVEC à la même concentration et supprime toute l'adhésivité leucocytaire basale et induite par le VEGF dans les HUVEC. [3] À des concentrations de 6 mM à 30 mM, elle induit rapidement une pycnose, un rétrécissement et une mort cellulaire subséquente dans les myocytes cardiaques. La mort des myocytes induite par la chélérythrine (30 μM) est accompagnée d'une fragmentation nucléaire et de l'activation des caspases-3 et -9 dans la culture primaire de myocytes ventriculaires de rat nouveau-né. À 10 μM, elle provoque la libération du cytochrome c des mitochondries, suggérant que les ROS médient la libération du cytochrome c induite par la chélérythrine dans les myocytes cardiaques. [4] Elle déplace le peptide du domaine BH3 marqué fluorescentement d'une protéine de fusion GST-BcLXL recombinante avec une IC50 de 1,5 μM. À 2,5 μM et 5 μM pendant 16 heures, elle induit une diminution substantielle du potentiel mitochondrial, comme l'indique une augmentation de la fluorescence verte JC-1 dans les cellules de neuroblastome humain SH-SY5Y. À 5 μM, elle induit également l'apparition d'ADN sub-G1, ce qui est indicatif d'apoptose dans les cellules SH-SY5Y. À 10 μM, elle induit un changement de potentiel mitochondrial et la libération de CytC des mitochondries dans les cellules SH-SY5Y. [5]

Le chlorure de Chélérythrine (NSC 646662) (5 mg/kg i.p.) entraîne un retard de croissance tumorale chez les souris porteuses de xénogreffes SQ-20B. [2] Le traitement avec ce composé (5 mg/kg) augmente significativement les noyaux TUNEL-positifs dans le myocarde ainsi que les formes clivées des caspases-3 et -9 chez le rat adulte. [4]

• dosage pour la protéine kinase C

  La protéine kinase C purifiée est préparée à partir de cerveau de rat. Brièvement, le mélange d'incubation (200 μL) contient 20 mM de tampon Tris/HCl (pH 7,5), 10 mM de MgCl₂, 200 μg/mL d'histones, des micelles préparées avec 700 μM de phosphatidylsérine et 180 μM de 1,2-dioléfine dans 0,3 % de triton X100, 0,2 mM de CaCl₂, 100 μM d'ATP, de [γ-³²P ]-ATP (10⁵ dpm), le chlorure de Chélérythrine (NSC 646662) à tester (solubilisé dans du diméthylsulfoxyde) et l'enzyme (0,5 μg de protéine). Après incubation à 30 °C pendant 3 minutes, la réaction est arrêtée par l'ajout de 3 mL d'acide trichloroacétique à 20 %. Les matériaux précipitables à l'acide sont recueillis sur des filtres Whatman GFE et lavés abondamment avec de l'acide trichloroacétique à 20 % glacé. La radioactivité sur les filtres est mesurée à l'aide d'un compteur à scintillation liquide. L'activité de la protéine kinase C est corrigée pour l'activité non spécifique en dosant en l'absence de micelles et de CaCl₂.

• Lignées cellulaires

  L-1210 cells

• Concentrations

  ~10 μM

• Temps dincubation

  2 days

• Méthode

  The lymphocytic mouse leukemia L1210 cells are plated sparsely at 1×10⁴ cells per well in 24-well cluster plates in RPMI 1640 medium containing 10% foetal calf serum, 4 mM glutamine, 100 U/mL penicillin, 100 pg/mL streptomycin sulphate and Chelerythrine Chloride (NSC 646662) to be tested (solubilized in dimethylsulphoxyde ). After a 2 day incubation period at 37 ℃ in a humidified atmosphere (5% CO₂ in air), growth is monitored by counting cell numbers in a coulter-counter. IC50 values are calculated on the basis of the linear regression lines established for this compound.

• Modèles animaux

  mice bearing SQ-20B xenografts

• Posologies

  5 mg/kg

• Administration

  Intraperitoneal injection