Cyclopamine (11-Deoxojervine)

N° de catalogueS1146 Lot :S114608

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Données techniques

Formule

C27H41NO2
Poids moléculaire 411.62 Numéro CAS 4449-51-8
Solubilité (25°C)* In vitro Ethanol 28 mg/mL (68.02 mM)
DMSO Insoluble
Water Insoluble
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Cyclopamine (11-déoxojervine) est un antagoniste spécifique de la voie de signalisation Hedgehog (Hh) de Smoothened (Smo) avec une IC50 de 46 nM dans les cellules TM3Hh12.
Cibles
Smoothened
(TM3Hh12 cells)
46 nM
In vitro La cyclopamine inhibe la voie de signalisation Hedgehog avec une IC50 de 46 nM, et bloque l'activité du récepteur humain Smo exprimé dans les cellules CHO-K1 dans le test de liaison [3H]Hh-Ag avec une IC50 de 280 nM. Ce composé inhibe de manière significative l'activité de la voie Hedgehog de manière dose-dépendante dans les lignées cellulaires tumorales dérivées de l'intestin exprimant l'ARNm de Patched (PTCH), et induit une inhibition de la croissance de ces lignées cellulaires tumorales de 75-95% à la concentration de 3 μM, mais est inefficace envers les cellules tumorales du côlon sans expression de l'ARNm de PTCH, suggérant que les effets de ce traitement chimique sont liés à la voie Hedgehog plutôt que généralement cytotoxiques. En bloquant la signalisation Hedgehog par interaction directe avec Smo, elle (10 μM) inhibe la prolifération des lignées cellulaires réactives à la Cyclopamine SMOhigh L3.6sl et Panc 05.04 de 75-80%, et augmente l'apoptose de 2,5 à 3,5 fois, sans affecter la lignée cellulaire BxPC3-SMOlow. Ce traitement diminue significativement l'ARNm de Snail et augmente les transcrits d'E-cadherin dans la lignée cellulaire E3LZ10.7. Indépendamment de l'inhibition de la croissance cellulaire, il inhibe significativement le phénotype invasif des cellules L3.6pl dépendantes de Hedgehog, entraînant une réduction >500 fois du nombre de cellules transmigrantes, mais pas celui de la lignée cellulaire Panc-1 indépendante de Hedgehog.
In vivo L'administration de Cyclopamine à une dose de 50 mg/kg/jour pendant 22 jours éradique les xénogreffes HUCCT1 chez la souris sans effets indésirables apparents. Ce traitement composé à une dose de 1,2 mg pendant 7 jours induit une apoptose significative des cellules tumorales et diminue la masse tumorale de 50 à 60% dans les tumeurs dérivées de Panc 05.04 et L3.6sl, respectivement, mais pas dans les tumeurs BxPC3-SMOlow. [3] L'administration de ce produit chimique seul inhibe profondément les métastases tumorales dans les xénogreffes de E3LZ10.7 et L3.6pl, et abroge complètement les métastases en combinaison avec la gemcitabine.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Essai cellulaire Hedgehog

    Cet essai mesure l'étape finale de la voie de signalisation Hh, c'est-à-dire la modulation transcriptionnelle de Gli, en utilisant la luciférase comme lecture (essai Gli-Luc). La cyclopamine est préparée pour l'essai par dilution en série dans du DMSO, puis ajoutée à des plaques d'essai vides. Les cellules TM3Hh12 (cellules TM3 contenant la construction de gène rapporteur sensible à Hh pTA-8xGli-Luc) sont resuspendues dans du F12 Ham's/DMEM (1:1) contenant 5% de FBS et 15 mM de Hepes pH 7,3, ajoutées aux plaques d'essai et incubées avec ce composé pendant environ 30 minutes à 37 °C dans 5% de CO2. 1 nM de Hh-Ag 1.5 est ensuite ajouté aux plaques d'essai et incubé à 37 °C en présence de 5% de CO2. Après 48 heures, soit du Bright-Glo, soit du réactif MTS est ajouté aux plaques d'essai et la luminescence ou l'absorbance à 492 nm est déterminée. La valeur de l'IC50, définie comme le point d'inflexion de la courbe logistique, est déterminée par régression non linéaire de la luminescence de la luciférase pilotée par Gli ou du signal d'absorbance de l'essai MTS vs log10 (concentration) de ce produit chimique à l'aide du progiciel statistique R.
Test cellulaire :[2]
  • Lignées cellulaires

    SEG1, OE33, KYAE, KYSE180, SNU1, AGS, SNU16, NCI-N-87, HUCCT1, PANC1, PL5, PL6, BXPC3, HS766T, KYSE150, GBD1, DLD1, and HCT116

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentration 3 μM

  • Temps dincubation

    4 days

  • Méthode

    Cells are exposed to Cyclopamine in 96-well plates. Cell viability is measured by MTS (soluble tetrazolium salt) assay. Viable cell mass is determined by optical density measurements at 490 nm (OD490) at 2 and 4 days using the CellTiter96 colorimetric assay. Relative growth is calculated as OD (day 4)﹣OD (day 2)/OD (day 2).
Étude animale :[2]
  • Modèles animaux

    Athymic (nude) mice inoculated subcutaneously with HUCCT1 cells

  • Posologies

    50 mg/kg/day

  • Administration

    Subcutaneous injection

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19091559/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520411/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520413/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17332349/

Validation du produit par le client

<p>(A)[3H]thymidine incorporation assay of B16F10 melanoma cells treated with DMSO or cyclopamine after incubation with SA-CM from WT and Cav1KO dermal fibroblasts. Representative phase-contrast images of B16F10 cells treated with SA-CM from WT and Cav1KO fibroblasts with cyclopamine are shown on the right. Similar experiments (B) were done with A-375 cells incubated with SA-CM from hTBJ1-shCtrl and hTBJ1-shCAV1 cells.</p>

Données de [ Cancer Res , 2012 , 72, 2262-74 ]

<p>(A) The effects of cyclopamine (10 μM) in pancreatic cancer cell invasion. The number of migrated cells was quantified by counting the number of cells from 10 random fields at 200 magnification. (B) The effects of cyclopamine on the expression of EMT-related molecules E-cadherin and vimentin, and Hh pathway-related proteins SMO and Gli-1 were analyzed by Western blotting following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor cyclopamine. Normal culture was used as a negative control. (C) The EMT-related molecules Ecadherin and vimentin mRNA levels, and Hh pathway-related genes at mRNA level were analyzed by real-time RT-PCR following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor Cyclopamine. Normal culture was used as a negative control.</p>

Données de [ Cancer Lett , 2012 , 322, 169-176 ]

<p>(A) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) for 72 hours promoted expansion of CD34+ cells and CD34- cells, cyclopamine (10 μM) for 72 hours induced apoptosis of CD34+ cells and CD34- cells, as measured by 3-(3,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) assay, n =4, bars, standard deviation. *Statistically significant compared with CD34+ cells. (B) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) promoted cell expansion after 48 hours and cyclopamine (10 μM) induced cell apoptosis within 24 hours measured by MTT assay (n=6).</p>

Données de [ Exp Hematol , 2012 , 40, 418-27 ]

<p>For MTT assays, cells (2,000 ~ 5,000 cells/well) were subcultured into 96-well plates according to their growth properties. Cell proliferation was assayed at 72 hr after treatment of Cyclopamine by adding 20 μl of 5 mg/ml 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) solution per 100 μl of growth medium. After incubating for 3-4 h at 37°C, the media were removed and 150 µl/well of MTT solvent (either absolute DMSO or isopropanol containing 4 mM HCl and 0.1% Nonidet-40) was added to dissolve the formazan. The absorbance of each well was measured by ELx808 (BioTek, Winooski, VT) or Wallac Victor2 (Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA) Microplate Reader. Viable cells are presented as percent of control, vehicle-treated cells.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

Sellecks Cyclopamine (11-Deoxojervine) A été cité par 148 Publications

The O-glycosyltransferase C1GALT1 promotes EWSR1::FLI1 expression and is a therapeutic target for Ewing sarcoma [ Nat Commun, 2025, 16(1):1267] PubMed: 39894896
PlexinD1 is a driver and a therapeutic target in advanced prostate cancer [ EMBO Mol Med, 2025, 17(2):336-364] PubMed: 39748059
PPARG contributes to urothelial integrity in the murine ureter by activating the expression of Shh and superficial cell-specific genes [ Development, 2025, 152(8)dev204324] PubMed: 40167323
Interplay of SHH, WNT and BMP4 signaling regulates the development of the lamina propria in the murine ureter [ Development, 2025, 152(3)DEV204214] PubMed: 39817691
Hedgehog inhibitors exert anti-proliferation effects and synergistically interact with trastuzumab in HER2-positive gastric cancer models [ Acta Oncol, 2025, 64:715-728] PubMed: 40426308
Inhibition of PI3K and Hedgehog Signaling Pathway Inhibits Hypoxia-Induced Vasculogenic Mimicry Formation in Ovarian Cancer Stem Cells [ Balk Med J, 2025, 42(5):440-451] PubMed: 40888349
SHH Pathway Inhibition and Astrocyte Co-culture Induce Distinct Responses in Glioblastoma and Cancer Stem Cells [ Res Sq, 2025, rs.3.rs-7214243] PubMed: 40894044
Proximity based proteomics reveals Git1 as a regulator of Smoothened signaling [ bioRxiv, 2025, 2025.01.06.631593] PubMed: 39829937
Foxo3-mediated physiological cell competition ensures robust tissue patterning throughout vertebrate development [ Nat Commun, 2024, 15(1):10662] PubMed: 39690179
Phosphorylation of human glioma-associated oncogene 1 on Ser937 regulates Sonic Hedgehog signaling in medulloblastoma [ Nat Commun, 2024, 15(1):987] PubMed: 38307877

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