Danoprevir

N° de catalogueS1183 Lot :S118301

Imprimer

Données techniques

Formule

C35H46FN5O9S
Poids moléculaire 731.83 Numéro CAS 850876-88-9
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 144 mg/mL (196.76 mM)
Ethanol 144 mg/mL (196.76 mM)
Water Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 3.600mg/ml (4.92mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 72 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 1.210mg/ml (1.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 24.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Danoprevir est un inhibiteur peptidomimétique de la protéase NS3/4A du virus de l'hépatite C (HCV) avec un IC50 de 0,2-3,5 nM. L'effet inhibiteur pour les génotypes 1A/1B/4/5/6 du HCV est environ 10 fois plus élevé que pour les génotypes 2B/3A. Phase 2.
Cibles
HCV NS3/4A protease
0.2 nM-3.5 nM
In vitro

Danoprevir (0,29 nM) inhibe la protéase NS3/4A du génotype 1 de référence à moitié maximale, mais une dose élevée de ce composé (10 μM) ne montre pas d'inhibition appréciable dans un panel de 79 protéases, canaux ioniques, transporteurs et récepteurs de surface cellulaire. Il reste lié et inhibe NS3/4A pendant plus de 5 heures après son association initiale. Ce produit chimique (45 nM) élimine un réplicon HCV de génotype 1b dérivé d'un patient des cellules Huh7 dérivées d'hépatocytes avec un EC50 de 1,8 nM. Dans les lignées cellulaires de réplicons sous-génomiques du HCV contenant les mutations individuelles, les substitutions V36M, R109K et V170A confèrent peu ou pas de résistance à celui-ci, mais la substitution R155K confère un niveau élevé (augmentation de 62 fois) de résistance à ce composé. Dans les cellules Huh7.5 transfectées avec un virus recombinant chimérique, il montre des effets d'inhibition antivirale contre les génotypes 1, 4 et 6 du HCV avec un IC50 de 2-3 nM, qui sont >100 fois inférieurs à ceux des génotypes 2/3/5 (280-750 nM).

In vivo

Danoprevir (30 mg/kg) administré à des rats ou des singes montre que ses concentrations dans le foie 12 heures après l'administration dépassent la concentration de ce composé requise pour éliminer l'ARN réplicon des cellules.

Caractéristiques Un inhibiteur peptidomimétique de la protéase NS3/4A du virus de l'hépatite C (HCV).

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Essai de transfert d'énergie par résonance de fluorescence continue (FRET)

    Le tampon d'essai contient 25 μM de peptide NS4A, 50 mM de Tris-HCl, pH 7,5, 15 % vol/vol, 10 mM de dithiothréitol et 0,5 μM de substrat FRET marqué au QXL520 {Ac-DE-Dap(QXL520)-EE-Abu-ψ-[COO]-AS-Cys(5-FAMsp)-NH2}. L'enzyme K2040 (50 pM) est ajoutée pour initier la réaction. Les réactions sont préparées dans des plaques noires à 96 puits et les données de fluorescence sont recueillies. Des réactions témoins sans inhibiteurs ni enzyme sont incluses. Les vitesses initiales sont calculées à partir de la phase linéaire de la réaction (jusqu'à 1 heure) et sont utilisées pour obtenir l'IC50. La récupération de l'activité du complexe préformé de ce composé-NS3/4A est évaluée en préincubant 10 nM de NS3/4A avec un excès double de ce produit chimique dans un tampon d'essai 1× pendant 15 min, suivi d'une dilution rapide de 200 fois du complexe préformé dans un tampon d'essai contenant le substrat. Une réaction témoin avec les mêmes conditions finales sans préincubation de NS3/4A et de ce composé est initiée par l'ajout de l'enzyme à un mélange réactionnel par ailleurs complet. Des réactions témoins supplémentaires sont dépourvues de ce produit chimique ou de NS3. L'évolution des réactions est suivie sur 5 heures.
Test cellulaire :

[1]
  • Lignées cellulaires

    Huh7 cells harboring HCV replicon

  • Concentrations

    5 pM - 100 nM

  • Temps dincubation

    48 hours

  • Méthode

    Serially diluted Danoprevir is added to Huh7 cells harboring the K2040 replicon 1 day after cell plating. For antiviral assays, after a 48-hour incubation, intracellular RNA is extracted, and the level of HCV replicon RNA is quantified by reverse transcription (RT)-PCR assay with the primers (5'-CACTCCCCTGTGAGGAACTACTG-3' and 5'-AGGCTGCACGACACTCATACT-3') and a probe (5'-6-FAM-CTTCACGCAGAAAGCGTCTAGCCATGG-MGBNFQ-3' using an ABI Prism 7900 sequence detection system. Here, FAM is 6-carboxyfluorescin and MGBNFQ is a molecular-groove binding non-fluorescence quencher specific to the HCV 5' untranslated region. Single-tube reactions are performed using the TaqMan Gold RT-PCR kit. Triplicate reactions for the RNA standards and samples are performed in 50 μL with 5 μL intracellular RNA (50 ng). RT is carried out at 48 °C for 30 min followed by 10 min at 95 °C. The PCR is run as follows: 15 seconds at 95 °C and 1 min at 60 °C for 40 cycles. Each RNA concentration is determined in triplicate. The absolute concentration of replicon RNA is calculated based on its signal relative to that of a standard curve generated by known concentrations of an in vitro-transcribed RNA corresponding to a genotype 1b 5' untranslated region. Replicon levels in the presence of this compound are fitted to a four-parameter logistic function to obtain EC50.
Étude animale :

[1]
  • Modèles animaux

    Sprague-Dawley rats, Cynomolgus monkeys

  • Posologies

    30 mg/kg

  • Administration

    Oral gavage

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18824605/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18637752/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21480315/

Validation du produit par le client

Western blot analysis of HCV NS3 protease cleavage of MAVS. The catalytic efficiency of four proteases (H, H-A156T, 41 and 41-A156T) from individuals H and 41 were tested in the absence or presence of an NS3 protease inhibitor (danoprevir). Expression of the HCV NS3 proteases resulted in cleavage of the lambda cI repressor with MAVS cleavage site. Expression of the protease was induced with IPTG for 3 h. The lambda cI repressor with MAVS cleavage site was not cleaved by an NS3 protease that included a substitution in catalytic residue S139A. Similarly, different catalytic efficiencies were observed with different proteases.

Données de [ Mol Biol Evol , 2014 , 31(6), 1546-53 ]

Suppression of HCV replication by anti-HCV inhibitors. HCV-Feo replicon-containing cells were seeded in 96-well plates at a density of 1 x 10<sub>4</sub> cells/well. Twenty-four hours later, cells were exposed to the indicated concentrations of danoprevir. After a 72-hour treatment with inhibitors, cells were harvested and firefly luciferase activity was measured. Results are the means and SDs of three independent experiments (upper panels). PrestoBlue cell viability reagent (Invitrogen, CA) was used to examine the cytotoxic effect of inhibitors according to the manufacturer

Données de [ Antimicrob Agents Chemother , 2012 , 56(10), 5365-73 ]

<p>Inhibition of HCV and CHV NS3/4A proteases in the presence of the protease inhibitors (A) 25a or (B) danoprevir. The graph illustrates the relative (%) lambda phage titer after selective growth of lambda in E. coli cells coexpressing the NS3/4A protease constructs and the lambda cI repressor expressing either MAVS or TRIF cleavage sites in the absence or presence of protease inhibitors (20 mM). No significant inhibition was detected with an HCV NS3/4A protease mutant carrying the substitution D168V, which confers resistance to protease inhibitors. Values are the means 6 standard deviations (error bars) of at least three experiments.</p>

Données de [ PLoS One , 2012 , 7, e42481 ]

<p>Effects of TNFα, etanercept, and danoprevir on HCV infection in HFLC. Cells (n=6 wells/condition) were treated with TNFα (20 ng/ml) ± etanercept (1 μg/ml), danoprevir (2 μM), or media control before and during infection with Jc1G. Secreted luciferase was measured 96 hours after the start of infection. Box-and-whiskers plot; whiskers represent minimum and maximum values. Values of p were calculated by one-way ANOVA. ***, p < 0.001; ****, p < 0.0001</p>

, , Gastroenterology, 2017, 153(2):566-578

Sellecks Danoprevir A été cité par 22 Publications

Targeting eEF1A reprograms translation and uncovers broad-spectrum antivirals against cap or m6A protein synthesis routes [ Nat Commun, 2025, 16(1):1087] PubMed: 39920115
The exon junction complex coordinates the cotranscriptional inclusion of blocks of neighboring exons [ Genes Dev, 2025, 10.1101/gad.353081.125] PubMed: 41102016
Zbtb16 determines the fate plasticity of cardiovascular progenitors through IGF2BP3-mediated mRNA stabilization [ Cell Rep, 2025, 44(8):116127] PubMed: 40779394
Small Molecule Targeting of Atypical p38 Protects Against Viral Infection [ FASEB J, 2025, 39(20):e71096] PubMed: 41082179
Preclinical characterization of a non-peptidomimetic HIV protease inhibitor with improved metabolic stability [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0137323.] PubMed: 38380945
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
RECOVER identifies synergistic drug combinations in vitro through sequential model optimization [ Cell Rep Methods, 2023, 3(10):100599] PubMed: 37797618
Integrative multiomics and in silico analysis revealed the role of ARHGEF1 and its screened antagonist in mild and severe COVID-19 patients [ J Cell Biochem, 2022, 10.1002/jcb.30213] PubMed: 35037717
Hepatitis C virus drugs that inhibit SARS-CoV-2 papain-like protease synergize with remdesivir to suppress viral replication in cell culture [ Cell Rep, 2021, 35(7):109133] PubMed: 33984267
Characterization of fluorescent probe substrates to develop an efficient high-throughput assay for neonatal hepatic CYP3A7 inhibition screening [ Sci Rep, 2021, 11(1):19443] PubMed: 34593846

POLITIQUE DE RETOUR
La politique de retour inconditionnelle de Selleck Chemical garantit une expérience dachat en ligne fluide à nos clients. Si vous nêtes en aucun cas satisfait de votre achat, vous pouvez retourner tout article dans les 7 jours suivant sa réception. En cas de problèmes de qualité du produit, quil sagisse de problèmes liés au protocole ou au produit, vous pouvez retourner tout article dans les 365 jours suivant la date dachat initiale. Veuillez suivre les instructions ci-dessous lors du retour des produits.

EXPÉDITION ET STOCKAGE
Les produits Selleck sont transportés à température ambiante. Si vous recevez le produit à température ambiante, soyez assuré que le service dinspection de la qualité de Selleck a mené des expériences pour vérifier que le placement à température normale pendant un mois naffectera pas lactivité biologique des produits en poudre. Après réception, veuillez stocker le produit conformément aux exigences décrites dans la fiche technique. La plupart des produits Selleck sont stables dans les conditions recommandées.

NON DESTINÉ À UN USAGE HUMAIN, VÉTÉRINAIRE DIAGNOSTIQUE OU THÉRAPEUTIQUE.