Patupilone (Epothilone B)

Patupilone (Epothilone B) montre une meilleure activité que l'épothilone A, avec un EC_0.01 de 1,8 μM. Il inhibe puissamment la prolifération cellulaire dans les cellules HCT116, avec une IC50 de 0,8 nM. [1] Ce composé induit un arrêt mitotique et présente une cytotoxicité dans les cellules KB3-1, KBV-1, Hela et Hs578T, avec une IC50 de 3 nM à 92 nM. Il entre en compétition avec le Taxol pour la liaison aux microtubules, avec une IC50 de 3,3 μM. [2] Dans les cellules MCF-7 surexprimant la GFP-α-tubuline, il (3,5 nM) bloque efficacement la dynamique des microtubules. Parallèlement, il induit un arrêt mitotique avec une IC50 de 3,5 nM. [3] Dans les cellules de myélome multiple (MM), y compris RPMI 8226, U266, MM.1S, LR5 et MR20, il supprime directement la prolifération avec une IC50 de 1 nM à 10 nM. De même, il (10 nM) induit également un arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose. [4] Une étude récente révèle que, dans les cellules ovariennes cancéreuses Hey, il (5 nM-100 nM) améliore l'antigène d'adhésion des cellules épithéliales de surface (EpCAM), sans affecter la transcription ou le niveau cellulaire total d'EpCAM. [5]

Dans un modèle de xénogreffe de souris de cellules RPMI 8226, le Patupilone (Epothilone B) (2,5 mg/kg-4 mg/kg) prolonge la survie et supprime la croissance tumorale. [4] De même, ce composé à la même dose inhibe également la croissance tumorale dans des modèles de xénogreffe de souris de cellules de cancer de la prostate, y compris DU145 et PC3. [6]

• Test de polymérisation de la tubuline

  Les protéines de microtubule (MTP) de cerveau de veau sont purifiées, ce qui comprend environ 15% à 20% de protéines associées aux microtubules. Le tampon (tampon MES) utilisé pour les études Epothilone B-microtubule contient 0,1 M d'acide 2-morpholinoéthanesulfonique (MES), 1 mM d'EGTA et 0,5 mM de MgCl₂ à pH 6,6. Les échantillons pour la microscopie électronique sont placés sur des grilles recouvertes de carbone-Parlodion (300 mesh) et colorés négativement avec 2% d'acétate d'uranyle. L'assemblage des microtubules en présence ou en l'absence de Patupilone (Epothilone B) est surveillé spectrophotométriquement à l'aide d'un spectrophotomètre équipé d'un circulateur de liquide à régulation thermostatique. La température est maintenue à 35 °C et les changements de turbidité (représentatifs de la masse polymère) sont surveillés à 350 nm. La concentration efficace (EC_0.01), définie comme la concentration interpolée capable d'induire une pente initiale de 0,01 DO/min, est calculée à l'aide de la formule EC_0.01 = concentration/pente et exprimée comme la moyenne avec l'écart type obtenu à partir de trois concentrations différentes.

• Lignées cellulaires

  KB3-1, KBV-1, Hela, and Hs578T cells

• Concentrations

  0–1 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  For mitotic block and aberrant mitosis, cells are plated either in 48-well plates (for blue and cell counting) or onto coverslips. After 24 hours, they are treated with Patupilone (Epothilone B) and scored at regular intervals. For the cytotoxicity analysis, cells are counted and scored as blue positive or negative. Concurrently, coverslips and aliquots of cells in the culture supernatant are fixed and stained with Hoechst33342 in PBS. These cells are scored for cells blocked at the G2/M transition and aberrant mitosis.

• Modèles animaux

  Mice xenograft model of RPMI 8226 cells

• Posologies

  2.5 mg/kg–4 mg/kg

• Administration

  Inject intravenously