Flavopiridol (Alvocidib, HMR-1275)

N° de catalogueS1230 Lot :S123010

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Données techniques

Formule

C21H20ClNO5
Poids moléculaire 401.84 Numéro CAS 146426-40-6
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 80 mg/mL (199.08 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 30%PEG300 65%ddH2O

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 2.500mg/ml (6.22mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG 300, mix evenly to clarify it; then continue to add 650 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Le Flavopiridol (Alvocidib) entre en compétition avec l'ATP pour inhiber les CDK, y compris CDK1, CDK2, CDK4, CDK6 et CDK9 avec des valeurs d'IC50 comprises entre 20 et 100 nM. Il est plus sélectif pour CDK1, 2, 4, 6, 9 par rapport à CDK7. Le Flavopiridol est initialement découvert pour inhiber l'EGFR et la PKA. Le Flavopiridol induit l'autophagy et le stress du RE. Le Flavopiridol bloque la réplication du HIV-1. Phase 1/2.
Cibles
CDK9
(Cell-free assay)		 CDK1
(Cell-free assay)		 CDK4
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 CDK6
(Cell-free assay)		 Voir plus
20 nM 30 nM 20-40 nM 40 nM 60 nM
In vitro Le Flavopiridol (Alvocidib) présente une activité moindre contre les kinases non apparentées telles que MAP, PAK, PKC et EGFR avec un IC50 > 14 μM. Il inhibe significativement la croissance des colonies de cellules HCT116, A2780, PC3 et Mia PaCa-2 avec des IC50 de 13 nM, 15 nM, 10 nM et 36 nM, respectivement. Ce composé inhibe également puissamment l'activité de la glycogène synthase kinase-3 (GSK-3) avec un IC50 de 280 nM. Comparé à d'autres CDK, il inhibe l'activité de CDK7 moins puissamment avec un IC50 de 875 nM. À 0,5 μM, il inhibe à la fois pSer807/811 Rb et pThr199 NPM, tandis que de légers changements sont observés au niveau de pThr821 Rb. Il diminue également le niveau global d'ARN polymérase II, ainsi que la phosphorylation de l'ARN polymérase II sur les répétitions CTD en Ser2 Ser5. En tant qu'inhibiteur de CDK à large spectre, il peut inhiber la progression du Cell Cycle en G1 ou en G2. À 0,3 μM, il induit un arrêt en G1 dans les cellules MCF-7 ou MDA-MB-468 par inhibition de l'activité kinase de CDK4 ou CDK2. Il présente une cytotoxicité puissante contre une grande variété de lignées de cellules tumorales avec des valeurs d'IC50 allant de 16 nM pour LNCAP à 130 nM pour K562.
In vivo L'administration de S1230 à 7,5 mg/kg pendant 7 jours présente une légère activité antitumorale contre la leucémie murine P388, entraînant une valeur %T/C de 110, et est active contre le carcinome ovarien humain A2780 implanté en sous-cutané chez des souris nues, produisant une destruction de 1,5 log de cellules (LCK). Le traitement S1230 à 1-2,5 mg/kg pendant 10 jours supprime significativement l'arthrite induite par le collagène chez les souris de manière dose-dépendante, en inhibant l'hyperplasie synoviale et la destruction articulaire, tandis que les concentrations sériques d'anticorps anti-collagène de type II (CII) et les réponses prolifératives au CII sont maintenues. Dans les xénogreffes Hct116 intactes de p21 chez des souris nues, l'administration de CPT-11 (100 mg/kg) suivie de S1230 (3 mg/kg) 7 et 16 heures plus tard inhibe significativement la régression tumorale de 86 % et 82 %, respectivement, affichant une inhibition de > 2 fois par rapport au CPT-11 seul de 40 %. La combinaison produit un taux de réponse complète (CR) d'environ 30 % contrairement au CPT-11 seul où aucune CR n'est trouvée.
Caractéristiques Premier inhibiteur de CDK à être utilisé dans des essais cliniques chez l'homme.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Essai kinase CDK

    Pour l'essai kinase CDK1/cycline B1, les réactions de kinase consistent en 100 ng de complexe GST-CDK1/cycline B1 (humain) exprimé par baculovirus, 1 μg d'histone HI, 0,2 μCi de [γ-33P]ATP, 25 μM d'ATP dans 50 μL de tampon kinase (50 mM Tris, pH 8,0, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,5 mM DTT). Pour l'essai kinase CDK2/cycline E, les réactions de kinase consistent en 5 ng de complexe GST-CDK2/cycline E (humain) exprimé par baculovirus, 0,5 μg de protéine de fusion GST-RB (acides aminés 776-928 de la protéine du rétinoblastome), 0,2 μCi de [γ-33P]ATP, 25 μM d'ATP dans 50 μL de tampon kinase (50 mM Hepes, pH 8,0, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT). Pour l'essai kinase CDK4/cycline D1, les réactions de kinase consistent en 150 ng de GST-CDK4/cycline D1 (humain) exprimé par baculovirus, 280 ng de Stag-cycline D1, 0,5 μg de protéine de fusion GST-RB (acides aminés 776-928 de la protéine du rétinoblastome), 0,2 μCi de [γ-33P]ATP, 25 μM d'ATP dans 50 μL de tampon kinase (50 mM Hepes, pH 8,0, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT). Les réactions sont incubées pendant 45 minutes pour CDK1 et CDK2, ou 1 heure pour CDK4 à 30 °C et arrêtées par l'addition d'acide trichloroacétique froid (TCA) à une concentration finale de 15 %. Les précipités de TCA sont recueillis sur des plaques unifilter GF/C à l'aide d'un moissonneur universel Filtermate et les filtres sont quantifiés à l'aide d'un compteur à scintillation liquide TopCount à 96 puits. Le Flavopiridol (Alvocidib) est dissous à 10 mM dans du diméthylformamide (DMF) et évalué à six concentrations, chacune en triple. La concentration finale de DMF dans l'essai = 2 %. Les valeurs d'IC50 sont dérivées par analyse de régression non linéaire et ont un coefficient de variation = 16 %. Pour évaluer son activité sur CDK6, un essai de liaison sur filtre est établi. Les éléments suivants sont combinés dans le mélange réactionnel : 2 μL de CDK6 (0,7 mg/μL), 5 μL d'histone H1 (6 mg/mL), 14 μL de tampon kinase (60 mM β-glycérophosphate, 30 mM p-nitrophényl phosphate, 25 mM MOPS (pH 7,0), 5 mM EGTA, 15 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,1 mM Na-vanadate), 3 μL de concentrations croissantes de ce composé diluées dans 50 % de DMSO, et 6 μL de 33P-ATP (1 mCi/mL) dans de l'ATP non radioactif à une concentration de 90 μM (concentration finale : 15 μM). L'essai est initié par l'addition de 33P-ATP. La réaction est incubée pendant 20 minutes à 30°C. Une aliquote de 25 μL du surnageant est ensuite déposée sur du papier phosphocellulose Whatman P81. Les filtres sont lavés 5 fois avec une solution d'acide phosphorique à 1 %. Les filtres humides sont comptés en présence de 1 mL de liquide de scintillation. L'activité de Cdk9 est mesurée en utilisant 50 nM de Cdk9/cycline T recombinant dans 50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 150 μM de peptide CDT de l'ARN polymérase et 80 μM d'ATP. L'essai Cdk7 est réalisé dans le même tampon en utilisant 37 nM de kinase purifiée en présence de 200 μM d'ATP et 10 μM de protéine de liaison à la myéline comme substrat. La puissance de ce composé envers CDK9 et CDK7 est déterminée en utilisant soit un essai basé sur un échangeur d'anions fort (résine Dowex 1-X8, forme formate) soit un essai de scintillation de proximité. Les valeurs d'IC50 sont calculées à partir des courbes dose-réponse.
Test cellulaire :

[5]
  • Lignées cellulaires

    MCF-7, LNCAP, PC3, HCT116, CACO-2, A549, HL60, K562 cells and et al.

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Temps dincubation

    72 hours

  • Méthode

    Cells are exposed to various concentrations of Flavopiridol (Alvocidib) for 72 hours, at which time the tetrazolium dye, MTS in combination with phenazine methosulfate, is added. After 3 hours, the absorbency is measured at 492 nm, which is proportional to the number of viable cells. The results are expressed as IC50 values. For cell cycle analysis, cells are fixed in paraformaldehyde and ethanol, washed, resuspended in a staining solution of TdT enzyme and FITC-dUTP, washed, stained with PI following RNase treatment, and then analyzed by flow cytometry.
Étude animale :

[5]
  • Modèles animaux

    Female Balb/c×DBA/2J F1 mice inoculated ip with P388 ascites leukemic cells, and Balb/c nu/nu nude mice subcutaneous implanted with A2780, Br-cycE, or A431 cells

  • Posologies

    ~7.5 mg/kg/day

  • Administration

    Injection i.p.

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11063609/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15689157/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8674031/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12190313/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18209094/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11751522/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11311660/

Validation du produit par le client

<p>(C) In vivo treatment of Tg:Pomc-Pttg;Pomc-eGFP embryos with small-molecule CDK inhibitors (50 μM) or 0.2% DMSO as control from 18 to 40 hpf. One hundred to one hundred fifty embryos were treated with each compound. Representative images of live embryos are shown with gross morphology (Right) and pituitary Pomc-GFP-positive cells at higher magnification (Left) at 40 hpf. Embryos exposed to flavopiridol developed early developmental defect before pituitary POMC cell ontogeny occurs. (D) Relative expression of pituitary Pomc-eGFP fluorescence analyzed using Volocity 5.2 software (Improvision; mean ±SE of relative expression, n = 7). (E) R-roscovitine specifically suppresses expansion of pituitary POMC cells overexpressing zPttg from 18 to 48 hpf. Double transgenic Tg:Pomc-Pttg;Prl-RFP embryos were generated by breeding Tg:Pomc-Pttg fish with a previously generated PRL-RFP transgenic line, in which RFP was targeted to pituitary lactotrophs by a zebrafish Prolactin promoter (34). Representative fluorescent microscopy of pituitary POMC-eGFP (a and b) and PRL-RFP (c and d) expression in live Tg:Pomc-Pttg; Pomc-eGFP and Tg:Pomc-Pttg;Prl-RFP embryos treated with 0.2% DMSO (a and c) or 50 μM R-roscovitine (b and d). (F) Relative expression of pituitary POMC-eGFP or PRL-RFP fluorescence were analyzed (mean ±SE of relative expression; n = 10). Results represent one of three similar experiments;*P < 0.02 and **P < 0.000005. (Scale bar, 50 μm.)</p>

Données de [ PNAS , 2011 , 108, 8417 ]

(A) After mitotic arrest and treatment with the proteasome inhibitor MG132, HeLa cells were treated with the indicated kinase inhibitors The cells were harvested, and the lysates were separated by SDS-PAGE and immunoblotted for phosphorylated RV[S/T]F (p-RV[S/T]F, top). The blot was quantified using ImageJ software and normalized to the mitotic sample (bottom). MLN8054, Aurora A and Aurora B inhibitor; ZM447439 and hesperadin, Aurora B inhibitors; BI2536, PLK1 inhibitor; flavopiridol, CDK1 inhibitor. n = 3. **P < 0.01, paired Student’s t test.

Données de [ , , Science, 2018, 11(530), doi: 10.1126/scisignal.aai8669 ]

G, human THP-1 cells were treated with various small-molecule inhibitors or chemotherapy at increasing concentrations for 24 hours and then analyzed for viability by flow cytometry for PI exclusion. Cells concurrently treated with palbociclib or dinaciclib were analyzed for cytostatis according to nuclear DNA content.

Données de [ , , Cancer Res, 2016, 76(5):1158-69 ]

UM cell lines OMM1, MM66, OMM2.3, MEL202 and MEL270 were treated with 20 nM quisinostat and 100 nM flavopiridol for 24 hours after which cells were harvested. Protein lysates were analyzed for the expression levels of c-Myc, RNA pol2-CTD Ser2 phosphorylation and acetylated histone 3 by Western blot. Expression of vinculin was analyzed to control for equal loading.

Données de [ , , Oncotarget, 2018, 9(5): 6174-6187 ]

Sellecks Flavopiridol (Alvocidib, HMR-1275) A été cité par 149 Publications

SLFN11-mediated ribosome biogenesis impairment induces TP53-independent apoptosis [ Mol Cell, 2025, S1097-2765(25)00042-5] PubMed: 39909041
Combined therapy with DR5-targeting antibody-drug conjugate and CDK inhibitors as a strategy for advanced colorectal cancer [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00231-9] PubMed: 40449480
Maternal CENP-C restores centromere symmetry in mammalian zygotes to ensure proper chromosome segregation [ Dev Cell, 2025, S1534-5807(25)00537-4] PubMed: 40997799
Identification of modulators of the ALT pathway through a native FISH-based optical screen [ Cell Rep, 2025, 44(1):115114] PubMed: 39729394
Identifying Age-Modulating Compounds Using a Novel Computational Framework for Evaluating Transcriptional Age [ Aging Cell, 2025, e70075] PubMed: 40307992
Protection of infant mice against pertussis, tuberculosis and influenza by co-administration of nasal pertussis vaccine candidate BPZE1 and BCG [ iScience, 2025, 28(7):112839] PubMed: 40612502
Replication-competent adenovirus reporters utilizing endogenous viral expression architecture [ J Virol, 2025, 99(10):e0114625] PubMed: 40928252
BET degraders reveal BRD4 disruption of 7SK and P-TEFb is critical for effective reactivation of latent HIV in CD4+ T-cells [ J Virol, 2025, 99(4):e0177724] PubMed: 40067013
Repurposing flavopiridol as an inhaled therapeutic for pulmonary fibrosis [ Eur J Pharmacol, 2025, 1005:178058] PubMed: 40816528
Bacterial ubiquitin ligase engineered for small molecule and protein target identification [ bioRxiv, 2025, 2025.03.20.644192] PubMed: 40166235

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