HA14-1

HA14-1 est une petite molécule et un ligand non peptidique d'une poche de surface de Bcl-2 avec une CI50 d'environ 9 μM. Ce composé induit l'apoptose des cellules HL-60 de manière dose-dépendante via l'activation de la caspase. [1] Il montre des effets cytotoxiques sur les lignées cellulaires B de lymphome folliculaire HF1A3, HF4.9 et HF28RA avec des LC50 de 4,5 μM, 12,6 μM et 8,1 μM respectivement. Ce produit chimique induit l'apoptose des cellules HF1A3, HF4.9 et HF28RA via la caspase et les ROS. [2]

Le traitement avec HA14-1 (400 nM) n'a eu aucun effet significatif sur la croissance des tumeurs de glioblastome chez des souris immunodéficientes. Mais ce composé augmente l'effet de l'agent endommageant l'ADN sur la croissance du glioblastome in vivo. [3]

• Détermination de l'affinité

  L'affinité de liaison des composés organiques à la protéine Bcl-2 in vitro est déterminée par un dosage de liaison compétitif basé sur la polarisation de fluorescence. Pour ce dosage, le 5-carboxyfluorécéine est couplé à l'extrémité N d'un peptide, GQVGRQLAIIGDDINR, dérivé du domaine BH3 de Bak (Flu-BakBH3), qui a montré qu'il se lie à la poche de surface de la protéine Bcl-xL avec une haute affinité. Selon nos études de modélisation moléculaire et nos mesures de liaison utilisant la polarisation de fluorescence, le peptide Flu-BakBH3 se lie à la poche de surface de Bcl-2 avec une affinité similaire. Le Bcl-2 utilisé dans ce dosage est une protéine soluble recombinante fusionnée à la GST. Flu-BakBH3 et la protéine Bcl-2 sont mélangés en présence ou en l'absence de composés organiques dans des conditions de tampon standard et sont incubés pendant 30 min. La liaison de Flu-BakBH3 à la protéine Bcl-2 est mesurée sur un spectromètre de luminescence LS-50 équipé de polariseurs utilisant une cellule de quartz à double chemin optique (500 μl). Le fluorophore est excité avec une lumière polarisée verticalement à 480 nm (largeur de fente d'excitation 15 nm), et la valeur de polarisation de la lumière émise est observée à travers des polariseurs verticaux et horizontaux à 530 nm (largeur de fente d'émission 15 nm). L'affinité de liaison de chaque composé pour la protéine Bcl-2 est évaluée en déterminant la capacité de différentes concentrations du composé à inhiber la liaison de Flu-BakBH3 à Bcl-2.

• Lignées cellulaires

  HF1A3, HF4.9 and HF28RA cells

• Concentrations

  ~25 μM

• Temps dincubation

  20 h

• Méthode

  The cytotoxic effects of HA14-1 against different FL cell lines are determined by the MTT assay. Briefly, the cells (5000/well) are incubated in triplicate in 96-well plate in the presence or absence of this compound for 20 h at 37 °C. Thereafter, the MTT solution is added to each well. After 4 h incubation at 37 °C, the optical density (OD) is measured by means of 96-well plate reader, with the extraction buffer as a blank. The following formula is used: percentage cell viability = (OD of the experiment samples/OD of the control) × 100. Sigmoidal dose-response curves are fitted to the mean cell viability plotted against log this chemical dose and lethal concentration 50% (LC50) values are calculated from the resulting curves using Prism 4.0 softw

• Modèles animaux

  Female Swiss nude mice bearing BeGBM xenografts.

• Posologies

  400 nM

• Administration

  Inject at the site of cell injection.