Hesperadin

N° de catalogueS1529 Lot :S152901

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Données techniques

Formule

C₂₉H₃₂N₄O₃S

Poids moléculaire

516.65

Numéro CAS

422513-13-1

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

103 mg/mL (199.36 mM)

Ethanol

1 mg/mL (1.93 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

Hesperadin inhibe puissamment Aurora B avec une IC50 de 250 nM dans un essai sans cellules. Il réduit nettement l'activité de l'AMPK, de la Lck, du MKK1, du MAPKAP-K1, du CHK1 et du PHK, tandis qu'il n'inhibe pas l'activité du MKK1 in vivo.

Cibles

TbAUK1 (Cell-free assay)	Aurora B (human) (Cell-free assay)
40 nM	250 nM

In vitro

Hesperadin inhibe la capacité de l'Aurora B immunoprécipitée à phosphoryler l'histone H3 avec une IC50 de 250 nM et réduit nettement l'activité d'autres kinases (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 et PHK) à une concentration de 1 μM. En revanche, seulement 20-100 nM de ce composé sont suffisants pour induire la perte de la phosphorylation de l'histone H3-Ser10 mitotique dans les cellules HeLa. Son traitement provoque des défauts de mitose et de cytocinèse, entraînant l'arrêt de la prolifération des cellules HeLa et la polyploïdisation, qui peuvent être spécifiquement attribués à l'inhibition de la fonction d'Aurora B pendant le processus d'attachement des chromosomes. Ce composé (100 nM) lève rapidement l'arrêt mitotique induit par le taxol ou le monastrol, mais pas par le nocodazole. Son traitement et le traitement au nocodazole dans les cellules HeLa abolissent la localisation kinétochorienne de BubR1 et diminuent l'intensité de Bub1 au niveau des kinétochores, suggérant que la fonction d'Aurora B est nécessaire pour un recrutement kinétochorien efficace de BubR1 et Bub1, ce qui pourrait à son tour être nécessaire pour une signalisation prolongée du point de contrôle. Il empêche la phosphorylation de l'histone H3 recombinante de trypanosome par la Trypanosoma brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) de Trypanosoma brucei pathogène avec une IC50 de 40 nM dans des essais de kinase in vitro. Ce produit chimique inhibe significativement la croissance cellulaire des formes sanguines infectieuses cultivées (BF) avec une IC50 de 48 nM, et n'inhibe que faiblement la croissance cellulaire des formes procycliques du stade insecte (PF) avec une IC50 de 550 nM.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Le dosage de la kinase Aurora B Pour le dosage de la kinase Aurora B, les cellules HeLa sont lysées dans un tampon contenant 50 mM de NaCl. L'extrait cellulaire total est centrifugé à 13 000 tr/min pendant 20 minutes à 4 °C à l'aide d'une centrifugeuse de paillasse. Le culot obtenu à partir de 200 mg d'extrait cellulaire total est à nouveau extrait dans 15 mL de tampon de lyse contenant 250 mM de NaCl afin d'obtenir la kinase Aurora B active à partir de la chromatine mitotique. Le surnageant à faible vitesse de ce dernier extrait est utilisé pour l'immunoprécipitation. L'anticorps monoclonal de souris anti-AIM-1, ou l'anticorps de souris anti-HA, est couplé à la GammaBind Plus Sepharose, et les billes sont agitées en rotation dans l'extrait pendant 90 minutes à 4 °C. Les billes sont lavées, aliquotées et lavées dans un tampon de kinase (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). Le dosage de la kinase est effectué avec 10 μL de billes dans 20 μL de tampon de kinase contenant 5 μg d'histone H3, 10 μM d'ATP, 2,5 μCi de [γ-³²P]ATP et différentes concentrations de ce composé pendant 20 minutes à 37 °C. Un tampon d'échantillon SDS est ajouté, et les échantillons sont bouillis et résolus par SDS-PAGE. Le gel est séché et le signal radioactif est détecté par analyse PhosphorImager. Les données sont analysées à l'aide du logiciel ImageQuant.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires HeLa cells and PtK1 cells Concentrations Final concentration ~500 nM Temps dincubation 24 and 48 hours Méthode Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Test kinase :^{^[1]}

Le dosage de la kinase Aurora B
Pour le dosage de la kinase Aurora B, les cellules HeLa sont lysées dans un tampon contenant 50 mM de NaCl. L'extrait cellulaire total est centrifugé à 13 000 tr/min pendant 20 minutes à 4 °C à l'aide d'une centrifugeuse de paillasse. Le culot obtenu à partir de 200 mg d'extrait cellulaire total est à nouveau extrait dans 15 mL de tampon de lyse contenant 250 mM de NaCl afin d'obtenir la kinase Aurora B active à partir de la chromatine mitotique. Le surnageant à faible vitesse de ce dernier extrait est utilisé pour l'immunoprécipitation. L'anticorps monoclonal de souris anti-AIM-1, ou l'anticorps de souris anti-HA, est couplé à la GammaBind Plus Sepharose, et les billes sont agitées en rotation dans l'extrait pendant 90 minutes à 4 °C. Les billes sont lavées, aliquotées et lavées dans un tampon de kinase (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). Le dosage de la kinase est effectué avec 10 μL de billes dans 20 μL de tampon de kinase contenant 5 μg d'histone H3, 10 μM d'ATP, 2,5 μCi de [γ-³²P]ATP et différentes concentrations de ce composé pendant 20 minutes à 37 °C. Un tampon d'échantillon SDS est ajouté, et les échantillons sont bouillis et résolus par SDS-PAGE. Le gel est séché et le signal radioactif est détecté par analyse PhosphorImager. Les données sont analysées à l'aide du logiciel ImageQuant.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
HeLa cells and PtK1 cells
Concentrations
Final concentration ~500 nM
Temps dincubation
24 and 48 hours
Méthode
Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12707311/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19320832/

Validation du produit par le client

: Données de [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: Données de [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: ,

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Hesperadin A été cité par 52 Publications

Homologous recombination promotes non-immunogenic mitotic cell death upon DNA damage [ Nat Cell Biol, 2025, 27(1):59-72]	PubMed: 39805921
A CPC-shelterin-BTR axis regulates mitotic telomere deprotection [ Nat Commun, 2025, 16(1):2277]	PubMed: 40097392
Identification of chemical inhibitors targeting long noncoding RNA through gene signature-based high throughput screening [ Int J Biol Macromol, 2025, 292:139119]	PubMed: 39722392
Rsk2 inhibition induces an aneuploid post-mitotic arrest of cell cycle progression in osteosarcoma cells [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):318]	PubMed: 40634321
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023]	PubMed: 40795355
Dynamic phosphorylation of FOXA1 by Aurora B guides post-mitotic gene reactivation [ Cell Rep, 2024, 43(9):114739]	PubMed: 39276350
Visualization strategies to aid interpretation of high-dimensional genotoxicity data [ Environ Mol Mutagen, 2024, 10.1002/em.22604]	PubMed: 38757760
Histone H3 phospho-regulation by KimH3 in both interphase and mitosis [ iScience, 2023, 26(4):106372]	PubMed: 37013187
Rsk2 and Lrp5 deficiency limit osteosarcoma growth in cFos-transgenic mice by different mechanisms [ ProQuest , 2023, 30683696]	PubMed: None
Hesperadin suppresses pancreatic cancer through ATF4/GADD45A axis at nanomolar concentrations [ Oncogene, 2022, 10.1038/s41388-022-02328-4]	PubMed: 35551503

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