Ispinesib (SB-715992)

Ispinesib (SB-715992) est un inhibiteur puissant, allostérique, réversible et spécifique de KSP, qui modifie la propriété de liaison de KSP aux microtubules et perturbe son mouvement en inhibant la libération d'ADP sans altérer la libération du complexe KSP-ADP des microtubules. [1] Ce composé montre une puissante activité cytotoxique dans un panel de lignées cellulaires tumorales, y compris Colo205, Colo201, HT-29, M5076, Madison-109 et MX-1, avec des IC50 de 1,2 nM à 9,5 nM. [2] Dans les cellules de cancer de la prostate PC-3, il (15 nM et 30 nM) bloque la prolifération cellulaire et induit l'apoptose en régulant les niveaux d'expression de gènes qui contrôlent l'apoptose, la prolifération cellulaire, le cycle cellulaire et la signalisation cellulaire, tels que EGFR, p27, p15 et IL-11. [3] Dans un panel de 53 lignées cellulaires mammaires, Ispinesib (7,4 nM–600 nM) démontre une large activité inhibitrice. Dans les cellules BT-474 et MDA-MB-468, il (150 nM) induit l'apoptose, comme le révèle une proportion plus élevée de cellules apoptotiques, un niveau plus faible de Bcl-X_L antiapoptotique et des niveaux plus élevés de Bax et Bid proapoptotiques. [4]

Ispinesib (SB-715992) (4,5 mg/kg–15 mg/kg) présente des effets inhibiteurs contre Colo205, Colo201, HT-29, mais pas contre les cellules MX-1, dans des modèles de xénogreffe de souris. Ce composé (6 mg/kg–10 mg/kg) inhibe également les tumeurs solides murines, y compris le carcinome pulmonaire Madison 109, le sarcome M5076, ainsi que les leucémies L1210 et P388. [2] Dans des modèles de xénogreffe de souris de cellules de cancer du sein MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468 et KPL4, il (8 mg/kg–10 mg/kg) inhibe la croissance tumorale. [4]

• Analyse cinétique à l'état stationnaire de l'activité ATPase de KSP humaine et inhibition par Ispinesib

  L'analyse de la spécificité de la Kinesin est réalisée à l'aide d'un système de détection pyruvate kinase-lactate déshydrogénase qui couple la production d'ADP à l'oxydation du NADH. Les changements d'absorbance sont surveillés à 340 nm. Des études à l'état stationnaire utilisant des concentrations nanomolaires de KSP sont effectuées à l'aide d'un essai sensible basé sur la fluorescence utilisant un système de détection couplé pyruvate kinase, pyruvate oxydase et peroxydase de raifort (HRP) qui couple la génération d'ADP à l'oxydation de l'Amplex Red en résorufine fluorescente. La génération de résorufine est surveillée par fluorescence (λ_excitation = 520 nm et λ_émission = 580 nm). Des expériences biochimiques à l'état stationnaire sont effectuées dans un tampon PEM25 [25 mM Pipes-K⁺ (pH 6,8), 2 mM MgCl₂, 1 mM EGTA] pour les expériences impliquant des microtubules. L'IC50 pour l'inhibition à l'état stationnaire est déterminée à 500 µM ATP, 5 µM microtubules et 1 nM KSP dans le tampon PEM25. Les valeurs de K_{i app} (constante de dissociation apparente de l'inhibiteur) d'Ispinesib (SB-715992) sont extraites des courbes dose-réponse, avec une correction explicite de la concentration enzymatique en utilisant l'équation de Morrison. La modalité de l'inhibiteur (par exemple, compétitif, non compétitif, incompétitif ou mixte) dans des conditions d'état stationnaire est déterminée en mesurant l'effet de sa concentration sur la vitesse initiale en fonction des concentrations de substrat. Les données sont ajustées à l'aide d'équations dans GraFit aux équations de vitesse pour les différents modes d'inhibition.

• Lignées cellulaires

  Breast cancer cells, including MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468, and KPL4

• Concentrations

  0.085 nM–33 µM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  After plating cells in log phase of growth in 96-well plates and treating them with Ispinesib (SB-715992) for 72 hours, cell growth is measured using CellTiter-Glo, and luminescence is detected using BioTek FLx800. Data are analyzed and the IC50 value, defined as the drug concentration that results in 50% growth inhibition relative to control, is calculated.

• Modèles animaux

  Nude (nu/nu) mice models of MCF7, KPL4, and HCC1954 cells; severe combined immunodeficient (SCID) mice model of MDA-MB-468 cells;

• Posologies

  10 mg/kg for nude mice or 8 mg/kg for SCID mice

• Administration

  Intraperitoneal injection on a q4d× schedule (3 doses, every 4 day