Ralimetinib (LY2228820) dimesylate

LY2228820 inhibe la p38α, ainsi que le niveau de phosphoMAPKAPK-2 (pMK2) dans les cellules RAW 264.7, avec des valeurs IC50 de 7 nM et 34,3 nM, respectivement. De plus, LY2228820 inhibe la formation de TNFα induite par le lipopolysaccharide (LPS) dans les macrophages péritonéaux murins, avec une IC50 de 5,2 nM. [1] Dans les cellules de myélome multiple (MM), y compris INA6, RPMI-8226, U266 et RPMI-Dox40, LY2228820 (200 nM–800 nM) bloque significativement la signalisation p38MAPK, comme le révèle son inhibition de la phosphorylation de HSP27, une cible en aval de la p38MAPK, sans affecter le niveau d'expression de HSP27. LY2228820 (200 nM–400 nM) améliore la cytotoxicité et l'apoptose, mais LY2228820 seul n'inhibe pas la croissance des cellules MM.1S. LY2228820 (200 nM–800 nM) inhibe également la sécrétion d'IL-6 et de MIP-1α dans les cellules stromales de moelle osseuse (LT-BMSC) à long terme, les cellules mononucléaires de moelle osseuse (BMMNC), les cellules CD138⁺, CD138⁻ du sang périphérique (PB) ou les cellules CD14⁺ du PB. LY2228820 (400 nM–800 nM) bloque également l'ostéoclastogenèse à partir des cellules CD14⁺. [2]

Chez les souris induites par le LPS, LY2228820 inhibe efficacement la formation de TNFα avec une dose minimale efficace seuil (TMED₅₀) inférieure à 1 mg/kg. Dans un modèle de rat atteint d'arthrite induite par le collagène (AIC), LY2228820 présente des effets puissants sur le gonflement des pattes, l'érosion osseuse et la destruction du cartilage, avec une dose minimale efficace seuil (TMED₅₀) de 1,5 mg/kg. [1]

• Inhibition de la p38α

  L'inhibition de la p38α est déterminée à l'aide de p38α humaine recombinante dans un protocole de liaison sur filtre standard utilisant l'ATP[γ-³³P] et le peptide de 21 acides aminés de l'EGFR comme substrat. L'inhibition fonctionnelle du TNFα dans les macrophages péritonéaux murins est déterminée en utilisant une stimulation par LPS en présence de LY2228820. Pour évaluer l'activité de la p38α dans les cellules plus directement, les cellules RAW 264.7 sont traitées avec LY2228820 puis stimulées avec l'anisomycine. Le niveau d'activité de la p38α est détecté à l'aide d'un anticorps anti-phosphoMAPKAPK-2 (pMK2) (Thr 334) qui réagit avec un résidu spécifiquement phosphorylé par la p38α.

• Lignées cellulaires

  MM cells, including INA6, RPMI-8226, U266, and RPMI-Dox40

• Concentrations

  200 nM–800 nM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  MTT assays and APO 2.7 staining are performed to assess cellular proliferation and induction of apoptosis, respectively. Viability is expressed as percent viable cells. Apoptosis in cells is evaluated by APO 2.7 staining. For detection of mitochondrial membrane protein 7A6 expressed in apoptotic cells, cells are incubated with APO 2.7 reagent for 20 min. Expression of APO 2.7 is determined using an EPICS XL flow cytometer.

• Modèles animaux

  Lipopolysaccharide (LPS)-induced Balb/c mice

• Posologies

  0–20 mg/kg

• Administration

  Oral bid dosing for 14 days