Zosuquidar 3HCl

Le LY335979 inhibe de manière compétitive la liaison à l'équilibre de la Pgp en bloquant le marquage par photoaffinité au [³H]azidopine de la Pgp dans les membranes plasmatiques de CEM/VLB₁₀₀. [1] Le LY335979 seul montre une cytotoxicité envers les lignées cellulaires sensibles aux médicaments et MDR avec des IC50 allant de 6 μM à 16 μM et produit sa capacité à inverser complètement la résistance des oncolytiques aux lignées cellulaires MDR P388/ADR, MCF7/ADR, 2780AD, ou UCLA-P3.003VLB à des concentrations de 0,1 et 0,5 μM. [1] Le LY335979 restaure significativement la sensibilité aux médicaments dans les lignées cellulaires leucémiques exprimant la P-gp, y compris K562/HHT40, K562/HHT90, K562/DOX et HL60/DNR, et améliore la cytotoxicité des anthracyclines et de l'ozogamicine (Mylotarg) dans les blastes de LAM primaires avec P-gp active. [2] Un article récent indique que le LY335979 inhibe complètement le transport apical du (Z)-endoxifène dans les cellules transduites par ABCB1. [3]

• Essai ATPase

  L'activité ATPase de la P-glycoprotéine est mesurée par la libération de phosphate inorganique de l'ATP. L'essai est mesuré dans une plaque à 96 puits pendant 90 min à 37 °C. Les membranes (8 μg-10 μg de protéines) sont incubées dans un volume total de 100 μL de tampon A contenant 5 mM d'azide de sodium, 1 mM d'ouabaïne, 1 mM d'EGTA, 3 mM d'ATP, un système de régénération d'ATP composé de 5 mM de phosphoénolpyruvate, et 3,6 unités/mL de pyruvate kinase en présence et en l'absence de 1 mM de vanadate de sodium. L'activité ATPase de la Pgp est définie comme la portion de l'activité ATPase totale sensible au vanadate. Les plaques sont lues 3 minutes après l'ajout de la solution de détection. L'absorbance est mesurée à 690 nm par un lecteur de microplaques. Une courbe étalon de phosphate est utilisée pour calculer le μmol de phosphate formé. Les échantillons sont mesurés en triple.

• Lignées cellulaires

  CEM/VLB₁₀₀, P388/ADR, MCF7/ADR, 2780AD, and UCLA-P3.OO3VLB cells

• Concentrations

  0.05 μM to 5 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cell viability is determined using a modified the MTT dye reduction method. Cells are harvested during logarithmic growth phase, and seeded in 96-well plates. The cells are then cultured for 72 hours in the presence of oncolytics with or without modulators. MCF-7 and MCF-7/ADR cells are incubated 24 hours before the addition of the drug with and without the LY335979. LY335979 is prepared as 2 mM DMSO stocks and added to wells to give final concentrations ranging from 0.05 to 5 μM. After 72 hours, 20 μL of freshly prepared MTT(5 mg/mL in Dulbecco's PBS) is added to each well and incubated for 4 hours in a 37 °C incubator containing 5% CO₂. Cells are pelleted in a Sorvall RT6000B centrifuge, 70 μL of medium is carefully removed from each well, and 100 μL of 2-propanol/0.04 N HC1 is added. Cells are resuspended 5-10 times with a Multipipettor or until no particulate matter is visible. Plates are immediately read on a Titertek Multiskan MCC/340 microplate reader Flow Laboratories with a test wavelength of 570 nm and a reference wavelength of 630 nm. Controls are measured in quadruplicate and modulators are measured in duplicate. Cytotoxicity analyses are also performed using the CeliTiter 96 AQueous assay kit.

• Modèles animaux

  P388 or P388/ADR cells are implanted by i.p. injection into female BDF₁ mice.

• Posologies

  ≤30 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p. and i.v.