TAE684 (NVP-TAE684)

TAE684 (NVP-TAE684) ne présente pas de réactivité croisée significative avec d'autres kinases. Ce composé inhibe puissamment la prolifération des cellules Ba/F3 NPM-ALK avec une IC50 de 3 nM, sans affecter la survie des cellules Ba/F3 même à 1 µM. Il inhibe également la prolifération des lignées cellulaires ALCL humaines exprimant NPM-ALK, y compris Karpas-299 et SU-DHL-1, avec une IC50 de 2 à 5 nM. La modélisation moléculaire révèle que L258 pourrait être l'un des principaux déterminants de la sélectivité de cette kinase pour cette substance chimique. Son traitement entraîne une inhibition rapide et soutenue de la phosphorylation de NPM-ALK. Le composé induit l'apoptose et l'arrêt en phase G1 dans les cellules Ba/F3 exprimant NPM-ALK et les lignées cellulaires de patients ALCL. [1] Il surmonte de manière significative la résistance des cellules H3122 CR, hébergeant l'oncogène de fusion EML4-ALK, diminuant la croissance cellulaire, supprimant la phosphorylation d'ALK et induisant l'apoptose.[2] La croissance des neurites induite par l'expression du mutant mALK R1279Q pourrait être complètement inhibée par ce composé à 30 nM. [3]

Après 4 semaines de traitement avec TAE684 (NVP-TAE684) à 3 et 10 mg/kg, il y a un retard significatif dans le développement du lymphome et une réduction du signal de luminescence de 100 à 1 000 fois, sans aucun signe de toxicité liée au composé ou à la maladie dans le modèle de lymphome de Karpas-299. Ce traitement composé induit également une régression de la maladie dans les lymphomes Karpas-299 établis et régule à la baisse l'expression de CD30. [1] Il montre également une activité antitumorale impressionnante contre les tumeurs de xénogreffe H3122 CR. [2] De plus, le traitement avec ce produit chimique améliore le phénotype des yeux rugueux des deux mutants ALK, en particulier celui observé avec ALKR1275Q. [3]

• Tests enzymatiques in vitro.

  Tous les tests enzymatiques in vitro sont réalisés chez Upstate Biotechnology à l'exception de l'InsR et de l'IGF-1R. Pour déterminer l'IC50 de TAE684 (NVP-TAE684) contre l'InsR et l'IGF-1R, un test de fluorescence résolue dans le temps homogène est effectué. L'ATP (10 mM) et 20 mg/ml de PolyEY biotinylé (Glu, Tyr 4:1) sont combinés avec 50 nL de dilutions en série de ce composé (10-500 nM) et 4 ng d'enzyme InsR en présence du tampon de réaction de la kinase (20 mM Tris-Cl, pH 7,5/10 mM MgCl₂/3 mM MnCl₂/1 mM DTT/10 mM NaVO₄/0,1 mg/ml de BSA). Les essais sont incubés pendant 1 heure à température ambiante. Les réactions sont terminées par l'ajout de 10 mL de la solution de détection contenant 50 mM d'EDTA, 500 mM de KF, 0,5 mg/ml de BSA, 5 mg/mL d'anticorps anti-phosphotyrosine Mab PT66-K marqué au cryptate Eu3+ et 5 mg/mL de Streptavidine-XLent. La réaction est incubée pendant une demi-heure, et les signaux de fluorescence sont lus sur Analyst GT.

• Lignées cellulaires

  Luciferase-expressing Karpas-299, SU-DHL-1, and Ba/F3 cells and transformed Ba/F3 stably expressing NPM-ALK, Bcr-Abl, or TEL-kinase fusion constructs.

• Concentrations

  1 nM-10 μM

• Temps dincubation

  2–3 days

• Méthode

  Cells are seeded in 384-well plates (2.5×10⁴ cells per well) and incubated with serial dilutions of TAE684 (NVP-TAE684) or DMSO for 2–3 days. Luciferase expression is used as a measure of cell proliferation/survival and is evaluated with the Bright-Glo Luciferase Assay System. IC50 values are generated by using XLFit software.

• Modèles animaux

  Karpas-299 xenografts are established in 4- to 6-week old female Fox Chase SCIDBeige mice.

• Posologies

  1, 3, and 10 mg/kg

• Administration

  Once daily by oral gavage for 3 weeks