PLX-4720

N° de catalogueS1152 Lot :S115204

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Données techniques

Formule

C17H14ClF2N3O3S
Poids moléculaire 413.83 Numéro CAS 918505-84-7
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 83 mg/mL (200.56 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description PLX4720 est un inhibiteur puissant et sélectif de B-RafV600E avec une IC50 de 13 nM dans un essai sans cellule, aussi puissant que c-Raf-1 (mutations Y340D et Y341D), 10 fois plus sélectif pour B-RafV600E que pour B-Raf de type sauvage.
Cibles
C-Raf-1 (Y340D/Y341D)
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 BRK
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
6.7 nM 13 nM 130 nM 160 nM
In vitro PLX-4720 présente une sélectivité >10 fois supérieure contre le B-Raf de type sauvage, et une sélectivité >100 fois supérieure aux autres kinases telles que Frk, Src, Fak, FGFR et Aurora A avec des IC50 de 1,3 à 3,4 μM. Ce composé inhibe significativement la phosphorylation d'ERK dans les lignées cellulaires porteuses de B-RafV600E avec des IC50 de 14 à 46 nM, mais pas les cellules avec le B-Raf de type sauvage. Il inhibe significativement la croissance des lignées de cellules tumorales porteuses de l'oncogène B-RafV600E, telles que COLO205, A375, WM2664 et COLO829 avec des GI50 de 0,31 μM, 0,50 μM, 1,5 μM et 1,7 μM, respectivement. De plus, ce traitement chimique à 1 μM induit un arrêt du cycle cellulaire et une apoptose exclusivement dans les cellules 1205Lu positives pour B-RafV600E, mais pas dans les cellules C8161 de type sauvage de B-Raf. Ce traitement par composé (10 μM) induit significativement une expression de BIM >14 fois plus élevée dans les cellules PTEN+, par rapport aux lignées cellulaires PTEN- (4 fois), ce qui explique la résistance des cellules PTEN- à cette apoptose induite par des produits chimiques.
In vivo L'administration orale de PLX-4720 à 20 mg/kg/jour induit des retards et des régressions significatifs de la croissance tumorale dans les xénogreffes tumorales COLO205 dépendantes de B-RafV600E, sans effets indésirables évidents chez les souris, même à une dose de 1 g/kg. Ce composé à 100 mg/kg deux fois par jour élimine presque complètement les xénogreffes 1205Lu portant B-RafV600E, tandis qu'il n'a aucune activité contre les xénogreffes C8161 portant le B-Raf de type sauvage. Les effets antitumoraux de ce composé sont corrélés au blocage de la voie MAPK dans ces cellules abritant la mutation V600E. Ce traitement chimique à 30 mg/kg/jour inhibe significativement la croissance tumorale des xénogreffes 8505c de >90 %, et diminue considérablement les métastases pulmonaires distantes.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Activités de la kinase Raf in vitro

    Les activités de la kinase Raf de type sauvage et des mutants in vitro sont déterminées en mesurant la phosphorylation de la protéine MEK biotinylée à l'aide de la technologie AlphaScreen de Perkin-Elmer. Pour chaque enzyme (0,1 ng), des réactions de 20 μL sont effectuées dans 20 mM Hepes (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01 % Tween-20, 100 nM de protéine biotin-MEK, diverses concentrations d'ATP et des concentrations croissantes de PLX-4720 à température ambiante. Les réactions sont arrêtées à 2, 5, 8, 10, 20 et 30 minutes avec 5 μL d'une solution contenant 20 mM Hepes (pH 7,0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA et 0,3 % BSA. La solution d'arrêt comprend également l'anticorps phospho-MEK, des billes de donneur recouvertes de streptavidine et des billes d'accepteur de protéine A du kit de détection de protéine A AlphaScreen. L'anticorps et les billes sont pré-incubés dans la solution d'arrêt dans l'obscurité à température ambiante pendant 30 minutes. La dilution finale de l'anticorps est de 1/2 000, et la concentration finale de chaque bille est de 10 μg/mL. Les plaques d'essai sont incubées à température ambiante pendant une heure, puis lues sur un lecteur AlphaQuest de PerkinElmer.
Test cellulaire :[1]
  • Lignées cellulaires

    COLO205, A375, WM2664, COLO829, HT716, SW620, H460, Calu-6, HCT116, SK-MEL2, SK-MEL3, Lovo, H1299, 1205Lu, and C8161 cells

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 mM

  • Temps dincubation

    24, 48, and 72 hours

  • Méthode

    Cells are treated with various concentrations PLX-4720 for 24, 48, and 72 hours. Cell proliferation is measured by using the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay or MTT assay. For cell cycle analysis, supernatant and cells are collected, pelleted, and fixed with 70% ethanol. Before staining with propidium iodide (10 μg/mL), cells are incubated for 1 hour at 37 °C in 0.5 mg/mL RNase I to rid samples of residual RNA contamination. Samples are then analyzed by using the EPICS XL apparatus. For the assessment of apoptosis, media and cells are harvested and pelleted before staining with annexin-FITC and propidium iodide. Samples are subsequently analyzed by using the EPICS XL apparatus.
Étude animale :[1]
  • Modèles animaux

    Female athymic mice (NCr nu/nu) implanted s.c. with COLO205 cells, and SCID mice with 1205Lu or C8161 cells

  • Posologies

    5, 20, or 100 mg/kg

  • Administration

    Oral gavage once or twice daily

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18287029/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317224/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20498063/

Validation du produit par le client

Combinatorial knockdown of NF1 and C-RAF abrogates NF1-mediated resistance to B-RAF inhibition at the level of ERK phosphorylation. A375 cells were infected with NF1 shRNA and treated with either DMSO or PLX4720 for 16 h. Cell lysates were analyzed for the indicated proteins.

Données de [ Cancer Discov , 2013 , 3, 350-62 ]

(D)Melanoma cell lines were treated with 0.5 uM Pi-103 and/or 2 uM PLX4720 for 4 h. Samples were analyzed by Western blotting for the indicated proteins. β-Actin served as a loading control. (E) Melanoma cell lines were treated with a dilution series of Pi-103 either alone or in combination with the BRAFV600E inhibitor PLX4720 at a concentration of 3 uM (D10) or 1 uM (453A0) for 3 d. Total cell numbers were determined with a cell titer blue assay. The Y-axis represents the percentage of living cells.

Données de [ Genes Dev , 2012 , 26, 1055-69 ]

<p>RAF inhibitors induce dimer formation between KSR and RAF, and activate KSR by CRAF. (A) GDC0879 but not PLX4720 induces BRAF/CRAF dimers. Cells overexpressing myc-CRAF and BRAF were treated with drug for 1 h and CRAF immunoprecipitates were immunoblotted for BRAF and CRAF (epitope tagged with myc). (B) GDC0879 but not PLX4720 enhances KSR/BRAF complexes. KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and BRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted using antibodies to BRAF. (C) Both GDC0879 and PLX4720 induce KSR/CRAF complexes.KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and myc-CRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted for CRAF using myc antibodies. (D and E) Requirement of KSR for drug-induced ERK activation. Lysates fromwild-type and KSR deficient fibroblasts, transfected with RASV12, were treated with the indicated doses of either GDC-0879 (D) or PLX4720 (E) for 1 h. Lysates were immunoblotted for phospho-ERK1 and 2, ERK2, and RASV12. (F) KSR and CRAF cooperate to activate MEK. Cells expressing the indicated constructs were treated with a 50 μM PLX4720 for 2 h before cell lysates were prepared and analyzed for pMEK by immunoblotting. CRAF(TM) refers to the T421M gatekeeper mutant that cannot bind to the drug(4). (G) KSR in vitro kinase reactions. Cells were cotransfected with WT or ATP binding deficient KSR and CRAF and immunoprecipitates prepared after cells were treated with an activating dose of PLX (10 μM) for 1 h. KSR immunoprecipitates were prepared, pretreated with 50 uM PLX4720 to inhibit coprecipitating RAF activity, and then tested for kinase activity using purified MEK. MEK phosphorylation was detected using a pMEK specific antibody.</p>

Données de [ Proc Natl Acad Sci USA , 2011 , 108, 6067-6072 ]

<p>PTEN predicts for PLX4720-induced apoptosis. A, basal PTEN and phospho-AKT(pAKT; S473, T308) expression in PTENt (WM164, 451Lu, SK-mel-28, WM983A, WM35, WM51) and PTEN (WM239A, WM266-4, WM793, M233, WM9, 1205Lu) melanoma cell lines. B, MTT assay of PTENt (gray)-expressing versus PTEN (black) cell lines. C, PTENt cells are more sensitive than PTEN cells to PLX4720-mediated apoptosis. Cells treated for 48 hours with 3 or 10 μmol/L PLX4720 before being stained for TMRM and Annexin-V. Apoptosis was measured by flow cytometry. Data shows mean SE mean of 3 independent experiments.*, PTENt cohort significantly different from PTEN cohort(P < 0.05).</p>

Données de [ Cancer Res , 2011 , 71, 2750-2760 ]

Sellecks PLX-4720 A été cité par 206 Publications

Elevated NR2F1 underlies the persistence of invasive disease after treatment of BRAF-mutant melanoma [ J Clin Invest, 2025, 135(18)e178446] PubMed: 40955663
Elevated Transglutaminase-2 in SOX10-Deficient Melanoma Promotes Tumor Onset and Decreases Intratumoral CD4+ T Cells [ Cancer Res, 2025, 10.1158/0008-5472.CAN-24-3267] PubMed: 40742313
PTRF Confers Melanoma-Acquired Drug Resistance Through the Upregulation of EGFR [ Cell Prolif, 2025, e70086.] PubMed: 40745979
A functional comparison of two transplantable syngeneic mouse models of melanoma: B16F0 and YUMM1.7 [ Biol Open, 2025, 14(9)bio062175] PubMed: 40878826
Noncanonical role of Golgi-associated macrophage TAZ in chronic inflammation and tumorigenesis [ Sci Adv, 2025, 11(4):eadq2395] PubMed: 39841821
The ribotoxic stress response drives UV-mediated cell death [ Cell, 2024, 187(14):3652-3670.e40] PubMed: 38843833
Tracking the EMT-like phenotype switching during targeted therapy in melanoma by analyzing extracellular vesicle phenotypes [ Biosens Bioelectron, 2024, 10.1016/j.bios.2023.115819] PubMed: 37952322
Mcl-1 mediates intrinsic resistance to RAF inhibitors in mutant BRAF papillary thyroid carcinoma [ Cell Death Discov, 2024, 10(1):175] PubMed: 38622136
The ERK5 pathway in BRAFV600E melanoma cells plays a role in development of acquired resistance to dabrafenib but not vemurafenib [ FEBS Lett, 2024, 10.1002/1873-3468.14960] PubMed: 38977937
Executioner caspases restrict mitochondrial RNA-driven Type I IFN induction during chemotherapy-induced apoptosis [ Nat Commun, 2023, 14(1):1399] PubMed: 36918588

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