Palomid 529 (P529)

Palomid 529 (P529) inhibe la prolifération et augmente l'apoptose des cellules endothéliales, inhibant la prolifération des cellules endothéliales induite par le VEGF et par le bFGF avec des IC50 de 20 nM et 30 nM, respectivement. Il conserve la capacité d'induire l'apoptose des cellules endothéliales et diminue la phosphorylation de pAktS473, pGSK3βS9 et pS6 induite par le VEGF-A. Cependant, ce composé n'empêche ni la protéine kinase activée par mitogène phosphorylée (pMAPK) ni pAktT308 aussi puissamment que pAktS473.[1] Il réduit non seulement la réponse proliférative dans la rétine ischémique, mais améliore également l'organisation et la structure des vaisseaux qui se forment. [1] P529 montre une puissante activité antiproliférative dans le panel de lignées cellulaires NCI-60, avec une inhibition de croissance de 50 (GI50) <35 μM. De plus, il améliore significativement l'effet antiprolifératif de la radiation dans les cellules de cancer de la prostate (PC-3), entraînant une inhibition de croissance dépendante de la concentration sur les cellules PC-3. Des doses de 2 et 7 μM ont entraîné une inhibition de croissance de 30 et 60 %, respectivement. Il inhibe l'activation de p-Akt induite par la radiation et diminue le rapport Bcl-2/Bax dans les PC-3. Ce composé inhibe non seulement la surexpression de Id-1 et VEGF induite par la radiation, mais régule également à la baisse la MMP-2 et la MMP-9 induites par la radiation. [2]

Palomid 529 (P529) montre une inhibition dose-dépendante de l'angiogenèse induite par Ad-VEGF-A suite à son traitement. Il inhibe la croissance tumorale de gliome C6V10 chez des souris nues après administration i.p. et diminue la signalisation AktS473 mais pas AktT308. Ce composé inhibe également la croissance tumorale, l'angiogenèse et la perméabilité vasculaire. [1] Le traitement de souris porteuses de tumeurs PC-3 avec celui-ci a réduit la croissance tumorale à 57,1 % par rapport aux contrôles. [2] C'est un suppresseur efficace de la prolifération des cellules de Müller, de la formation de cicatrices gliales et de la mort des cellules photoréceptrices dans un modèle de décollement de la rétine (RD) chez le lapin. [3] Palomid 529 supprime significativement la croissance tumorale déficiente en Brca1 chez la souris par inhibition de la signalisation Akt et mTOR. [4]

• Tests de liaison aux récepteurs des œstrogènes

  Les protéines sont produites avec des lysats de réticulocytes de lapin. La quantité de matrice utilisée dans chaque réaction est déterminée empiriquement et l'expression est surveillée dans des réactions parallèles où la [³⁵S]méthionine est incorporée dans le récepteur, suivie d'une électrophorèse sur gel et d'une exposition à un film. Les réactions de liaison des récepteurs d'œstrogènes (ER) et de Palomid 529 (P529) sont effectuées dans des volumes finaux de 100 μL dans un tampon TEG [10 mM Tris (pH 7,5), 1,5 mM EDTA, 10 % de glycérol]. Un récepteur transcrit-traduit in vitro (5 μL) est utilisé dans chaque réaction de liaison en présence de 0,5 nM de [³H]œstradiol (E2). Ce composé est systématiquement testé de 10^-11 à 10^-6 M et dilué dans l'éthanol. Les réactions sont incubées à 4 °C pendant une nuit et l'E2 lié est quantifié par l'ajout de 200 μL de charbon enrobé de dextrane. Après une rotation de 15 minutes à 4 °C, les tubes sont centrifugés pendant 10 minutes et 150 μL du surnageant sont ajoutés à 5 mL de mélange de scintillation pour la détermination du cpm par comptage par scintillation liquide. La liaison maximale est déterminée en compétant l'E2 lié avec uniquement le véhicule éthanolique. Des contrôles pour le bruit de fond sont inclus dans chaque expérience en utilisant 5 μL de lysat de réticulocytes de lapin non programmé. Cette valeur, typiquement 10 % à 15 % des comptages maximaux, est soustraite de toutes les valeurs. Les données sont tracées et les valeurs de K_i sont calculées. Les expériences sont menées au moins trois fois en duplicata.

• Lignées cellulaires

  Human umbilical vascular endothelial cells (HUVEC)

• Concentrations

  ~20 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  Human umbilical vascular endothelial cells (HUVEC) are used. The proliferation assay is carried out by seeding the HUVECs in 96-well plates at a density of 1,000 per well in complete medium. Following a 24-hour plating period, the cells are starved for 24 hours in 0.5% serum before being treated with Palomid 529 (P529) in the presence of 10 ng/mL basic fibroblast growth factor (bFGF) or VEGF in complete medium. After 48 hours, cell number is determined using a colorimetric method. The results are expressed as the percentage of the maximal bFGF or VEGF response in the absence of this compound. Nonproliferating endothelial cells are assayed by growing HUVECs to quiescence in 96-well plates and treating with it for 48 hours. Initially, 5,000 cells per well are seeded and confluence is achieved the next day. The plates are incubated for another 24 hours to ensure growth arrest before treatment with the same compound.