Pelitinib (EKB-569)

N° de catalogueS1392 Lot :S139201

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Données techniques

Formule

C24H23ClFN5O2
Poids moléculaire 467.92 Numéro CAS 257933-82-7
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 13 mg/mL (27.78 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Le Pelitinib (EKB-569) est un puissant inhibiteur irréversible de l'EGFR avec une IC50 de 38,5 nM. Ce composé inhibe également légèrement Src, MEK/ERK et ErbB2 avec des IC50 de 282 nM, 800 nM et 1255 nM, respectivement. Phase 2.
Cibles
EGFR Src MEK/ERK ErbB2 Raf
38.5 nM 282 nM 800 nM 1.255 μM 3.353 μM
In vitro Le Pelitinib (EKB-569) présente une activité inhibitrice beaucoup plus élevée contre l'EGFR, comparé au c-erbB-2 étroitement apparenté, ainsi qu'à d'autres kinases telles que Src, Cdk4, c-Met, Raf et MEK/ERK, avec une IC50 allant de 282 nM pour Src à >20 μM pour Cdk4. En conséquence, le traitement par ce composé inhibe significativement l'autophosphorylation de l'EGFR mais pas du c-Met dans les cellules A431. Il inhibe puissamment la prolifération des kératinocytes humains normaux (NHEK), ainsi que des cellules tumorales A431 et MDA-468 avec des IC50 de 61 nM, 125 nM et 260 nM, respectivement, tout en présentant peu d'activité contre les cellules MCF-7 avec une IC50 de 3,6 μM. Ce produit chimique inhibe la phosphorylation de l'EGFR induite par l'EGF dans les cellules A431 et NHEK avec une IC50 de 20-80 nM, ainsi que la phosphorylation de STAT3 avec une IC50 de 30-70 nM. À 75-500 nM, il inhibe également spécifiquement l'activation d'AKT et d'ERK1/2, sans affecter la voie NF-κB. Dans les cellules NHEK, ce composé inhibe également puissamment l'activation de l'EGFR médiée par le TGF-α avec une IC50 de 56 nM, ainsi que l'activation de STAT3 et d'ERK1/2 avec des IC50 respectives de 60 nM et 62 nM.
In vivo Une dose orale unique de 10 mg/kg de Pelitinib (EKB-569) inhibe puissamment la phosphorylation de l'EGFR dans les xénogreffes A431 avec une surexpression de l'EGFR, de 90% en 1 heure et de >50% après 24 heures. L'administration de ce composé à 20 mg/kg/jour inhibe la tumorigenèse chez les souris APCMin/+ de 87%, ce qui équivaut à l'effet de 2 doses d'EKI-785 (40 mg/kg/jour), ce qui est cohérent avec une plus grande puissance in vivo. Ce produit chimique inhibe sélectivement la signalisation de l'EGFR dans les cellules épithéliales des voies respiratoires in vivo. Dans le modèle murin de remodelage épithélial des voies respiratoires qui est inductible par une infection virale et qui présente un passage tardif mais permanent à une métaplasie des cellules caliciformes, le traitement par ce composé à 20 mg/kg/jour corrige les 3 aspects du remodelage épithélial, en bloquant complètement l'augmentation des cellules ciliées et la diminution des cellules de Clara, et en inhibant significativement la métaplasie des cellules caliciformes.
Caractéristiques Une version améliorée de l'EKI-785.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Autophosphorylation de l'EGFR dans les cellules

    Pour les expériences utilisant des cellules en culture, les cellules A431 sont traitées avec diverses concentrations de Pelitinib (EKB-569) pendant 2,75 heures avant une co-incubation avec 100 ng/mL d'EGF pendant 0,25 heure. Les cellules sont lavées deux fois avec du phosphate-buffered saline (PBS) froid avant d'être ajoutées au tampon de lyse (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% désoxycholate de sodium, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatin A, 10 mg/mL leupeptine, 20 KIU/mL aprotinine, 2 mM orthovanadate de sodium et 100 mM fluorure de sodium) pendant 20 minutes sur glace, avant immunoprécipitation et SDS-PAGE-immunoblotting. Pour l'immunoprécipitation, les cellules cultivées sont placées dans un tampon de lyse froid et immédiatement homogénéisées sur glace avec un polytron avec plusieurs impulsions. L'homogénat est d'abord centrifugé à 2500 tr/min (20 minutes, 4 °C), puis à nouveau à 14 000 tr/min dans une microcentrifugeuse (10 minutes, 4 °C). Les surnageants (1000 μg de protéines) sont incubés pendant 2 heures à 4 °C avec 15 mL d'anticorps polyclonal anti-EGFR. Après 2 heures, 50 μL de billes d'agarose protéine G plus/protéine A sont ajoutées et incubées sous rotation constante pendant 2 heures à 4 °C. Après lavage avec le tampon de lyse, les billes sont bouillies pendant 2 minutes dans le tampon d'échantillon de Laemmli. Les protéines sont ensuite résolues par SDS-PAGE, transférées sur une membrane d'immobilisation et sondées pendant une nuit avec un anticorps anti-phosphotyrosine conjugué à la peroxydase de raifort (HRP). Les membranes sont développées à l'aide du réactif ECL. La protéine EGFR totale est déterminée en décapant les membranes et en les re-sondant avec des anticorps spécifiques du récepteur. La quantification des bandes est effectuée par densitométrie, à l'aide du logiciel ImageQuant avec un scanner de transmittance laser Molecular Dynamics.
Test cellulaire :

[2]
  • Lignées cellulaires

    NHEK, A431, MCF-7, and MDA-468

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Temps dincubation

    5 days

  • Méthode

    Cells are seeded in 96-well dishes, and after 2 hours, Pelitinib (EKB-569) is added and incubated for 5 days. After incubation, the medium is removed from each well and fresh medium (150 μL) + 1 mg/mL MTT solution (50 μL) is added. After incubation for 2 hours at 37 °C, the medium is replaced with 150 μL DMSO, and absorbance at 540 nm in each well is determined. The IC50 is calculated by linear regression of the data.
Étude animale :

[1]
  • Modèles animaux

    Athymic nu/nu female mice bearing subcutaneous A431 tumors, or APCMin/+ male mice, a murine model of human familial adenomatous polyposis (FAP)

  • Posologies

    10, or 20 mg/kg/day

  • Administration

    Oral gavage

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973323/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14749472/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16453019/

Validation du produit par le client

HBMEC were preincubated with the indicated concentrations of either ErB1/2/4 inhibitor (Pelitinib; EKB-569), and cells were then infected for 4 h with the unencapsulated strain, MC58 siaD. The numbers of adherent (black bars) and invasive (gray bars) bacteria were determined in a gentamicin protection assay. The graphs show the percentages of adhesion and invasion of inhibitor-treated cells, relative to control cells (means 盨D of three independent experiments performed in duplicate). *, P < 0.05.

Données de [ Infect Immun , 2014 , 82(3), 1243-55 ]

<p>IGF-1 and IL-1β mediated induction of Bcl-2 expression involves EGFR.   (A)  Bcl-2 mRNA levels in AALEBs treated with IGF-1 or IL-1β in the presence or absence of two EGFR tyrosine kinase inhibitors, EKB-569 (1 μM) or PD153035 (1 μM). </p>

Données de [ J Immunol , 2012 , 188, 4581-4589 ]

Immunofluorescence Assay. PDCD4, GRA3, and overlapping are represented in red, green, and yellow, respectively. Group I TKIs sunitinib and AZD9291 show similar results to that of the negative control with PDCD4 and GRA3 well localized inside the nuclei. Mild disruption of PDCD4 in the nuclei is observed with Group II TKIs gefitinib, erlotinib, and AG1478. Group III TKIs neratinib, afatinib, and pelitinib show comparable changes to that of pyrimethamine 5 μM, with complete disruption of PDCD4 and GRA3, without any localization. The assays were repeated 3 times, and each experiment was performed in triplicate. A representative result is shown (x1,000).

Données de [ , , Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503 ]

Sellecks Pelitinib (EKB-569) A été cité par 11 Publications

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
EGFR Inhibition Potentiates FGFR Inhibitor Therapy and Overcomes Resistance in FGFR2 Fusion-Positive Cholangiocarcinoma [ Cancer Discov, 2022, 12(5):1378-1395] PubMed: 35420673
The multi-kinase inhibitor afatinib serves as a novel candidate for the treatment of human uveal melanoma [ Cell Oncol (Dordr), 2022, 45(4):601-619] PubMed: 35781872
Biomarker LEPRE1 induces pelitinib-specific drug responsiveness by regulating ABCG2 expression and tumor transition states in human leukemia and lung cancer [ Sci Rep, 2022, 12(1):2928] PubMed: 35190588
A Genome-Scale CRISPR Screen Identifies the ERBB and mTOR Signalling Networks as Key Determinants of Response to PI3K Inhibition in Pancreatic Cancer [ Mol Cancer Ther, 2020, 5;molcanther.1131.2019] PubMed: 32371585
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790] PubMed: 31160710
Suppressors for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2/4 (HER2/4): A New Family of Anti-Toxoplasmic Agents in ARPE-19 Cells [Kim YH Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503] PubMed: 29103264
Sensitivity of Melanoma Cells to EGFR and FGFR Activation but Not Inhibition is Influenced by Oncogenic BRAF and NRAS Mutations. [Garay T, et al. Pathol Oncol Res, 2015, 10.1007/s12253-015-9916-9] PubMed: 25749811
Selective inhibition of human solute carrier transporters by multikinase inhibitors [Johnston RA, et al. Drug Metab Dispos, 2014, 42(11):1851-7] PubMed: 25165131
Role of epidermal growth factor receptor signaling in the interaction of Neisseria meningitidis with endothelial cells [Slanina H et al. Infect Immun, 2014, 82(3):1243-55] PubMed: 24379285

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