RAF265 (CHIR-265)

N° de catalogueS2161 Lot :S216104

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Données techniques

Formule

C24H16F6N6O
Poids moléculaire 518.41 Numéro CAS 927880-90-8
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (192.89 mM)
Ethanol 45 mg/mL (86.8 mM)
Water Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description RAF265 (CHIR-265) est un puissant inhibiteur sélectif de C-Raf/B-Raf/B-Raf V600E avec un IC50 de 3-60 nM, et présente une forte inhibition de la phosphorylation de VEGFR2 avec un EC50 de 30 nM dans des essais sans cellules. Ce composé induit un arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose. Phase 2.
Cibles
VEGFR2
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
30 nM(EC50) 3 nM-60 nM
In vitro RAF265 (CHIR-265) inhibe C-Raf, le B-Raf de type sauvage et le B-Raf mutant (V600E). Ce composé bloque efficacement la phosphorylation des substrats en aval de Raf, MEK et ERK dans les cellules, et tue également les lignées cellulaires de mélanome et de cancer colorectal hébergeant des mutations de B-Raf indépendamment du statut de mutation de PTEN. L'inhibition de la kinase Raf par cet agent dans les lignées cellulaires de mélanome B-Raf mutantes provoque un arrêt du cycle cellulaire et induit l'apoptose, mimant l'effet de l'ARN interférent Raf dans ces cellules. Il inhibe également puissamment la phosphorylation de VEGFR2 et la prolifération des hMVEC stimulées par le VEGF. Dans les cellules HT29 et MDAMB231, cette substance chimique montre une activité inhibitrice avec un IC20 de 1 à 3 μM et un IC50 de 5 à 10 μM, respectivement. Alors qu'elle entraîne une diminution significative de la survie clonogénique dans toutes les lignées cellulaires testées, ce qui signifie que ce composé induit un effet dominant sur la survie clonogénique. L'ajout de cet agent à RAD001 dans les cellules HCT116 pourrait entraîner une phosphorylation modérément diminuée d'AKT, de la protéine S6 et de 4EBP1. Il réduit nettement le niveau de protéine Bcl-2 et est très inhibiteur dans les cellules CM et NCI-H727, sans avoir d'effet sur la susceptibilité au TRAIL des cellules BON1 et GOT1. La protéine kinase D3 (PRKD3) qui, lorsqu'elle est supprimée, pourrait améliorer la destruction cellulaire par ce composé dans les cellules de mélanome A2058, ce qui empêche la réactivation de la signalisation MAPK, induit le clivage de PARP, augmente l'activité de la caspase, interrompt la progression du cycle cellulaire et inhibe la formation de colonies.
In vivo RAF265 (CHIR-265) montre 71% à 72% de TVI% (pourcentage d'inhibition du volume tumoral) dans les xénogreffes HCT116 à 12 mg/kg. Tandis que la combinaison de ce composé et de RAD001 montre une activité antitumorale améliorée avec un T10 (temps pour atteindre un volume tumoral relatif de 10 fois le volume tumoral initial) et un retard de croissance tumorale accrus. La combinaison de RAD001 et de ce produit chimique améliore également significativement l'activation de la caspase-3 dans les xénogreffes HCT116 et MDAMB231, mais pas dans les xénogreffes A549. Ce composé inhibe l'accumulation de FDG (2-désoxy-2-[18F]fluoro-d-glucose) et diminue les volumes tumoraux dans les xénogreffes A375M à une dose orale de 100 mg/kg.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Protocole d'essai

    Raf et Mek sont combinés à 2 × les concentrations finales dans un tampon d'essai (50 mM Tris, pH 7,5, 15 mM MgCl2, 0,1 mM EDTA et 1 mM DTT) et dispensés à raison de 15 μL par puits dans des plaques d'essai en polypropylène. Les niveaux de fond sont déterminés dans des puits contenant du Mek et du DMSO sans Raf. Aux puits contenant Raf/Mek, on ajoute 3 μL de 10 × de ce composé dilué dans 100% de DMSO. La réaction d'activité de la kinase raf est démarrée par l'ajout de 12 μL par puits de 2,5 × 33P-ATP dilué dans le tampon d'essai. Après 45-60 minutes, les réactions sont arrêtées par l'ajout de 70 μL de réactif d'arrêt (30 mM EDTA). Les plaques de filtration sont pré-humidifiées pendant 5 min avec 70% d'éthanol, puis rincées par filtration avec un tampon de lavage. Des échantillons (90 μL) des puits de réaction sont ensuite transférés sur les plaques de filtration. Les plaques de filtration sont lavées 6 × avec un tampon de lavage à l'aide d'un appareil de filtration Millipore. Les plaques sont séchées et 100 μL par puits de liquide de scintillation sont ajoutés. Le CPM est ensuite déterminé à l'aide d'un lecteur Wallac Microbeta 1450.
Test cellulaire :[2]
  • Lignées cellulaires

    Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines

  • Concentrations

    0.1 - 10 μM

  • Temps dincubation

    48 hours

  • Méthode

    The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 (CHIR-265) on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, this compound is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
Étude animale :[2]
  • Modèles animaux

    A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.

  • Posologies

    12 mg/kg

  • Administration

    Orally administered daily

Références

  • http://www.aacrmeetingabstracts.org/cgi/content/meeting_abstract/2008/1_Annual_Meeting/4876
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20124452/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317202/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

Validation du produit par le client

<p>Immunoblots showing levels of phospho-MEK (p-MEK), total MEK (t-MEK), phospho-ERK1/2 (p-ERK1/2) and total ERK1/2 (t-ERK1/2) in A375 cells transduced with a retrovirus expressing BRAFV600E, BRAFV600E/L505H, BRAFV600E/F516G or BRAFV600E/T529N and treated with increasing doses of RAF265. α-tubulin (TUBA) was monitored as a loading control.</p>

Données de [ Pigment Cell Melanoma Res , 2014 , 27(1), 124-33 ]

Raf265 inhibited the kinase activity of B-Raf but not of Raf-1 in Pkd2cKO cholangiocytes. Cells were treated for 30 min with different concentrations of Raf265. B-Raf and Raf-1 were immunoprecipated as described in the methods section and a kinase assay in vitro was performed using MEK as a substrate. The kinase activity of Raf was assessed by immunoblot analysis and quantified as optical density of pMEK with respect to untreated cells. In WT cholangiocytes (A) Raf265 inhibited both B-Raf and Raf-1 kinase activity. In Pkd2cKO cholangiocytes (B), Raf265 inhibited only B-Raf while a biphasic effect was found in Raf-1 with a significant increase at doses from 0.001 to 1 uM and a significant inhibition at 10 uM. Blots are representative of four different experiments. (*p<0.05 vs controls; **p<0.001 vs controls).

Données de [ Hepatology , 2012 , 56(6), 2363-74 ]

LS513 cells were treated with increasing concentrations of selumetinib or selumetinib combined with different concentration of RAF265 for 48 hr. Lysates were subjected to western blot analyses, and membranes were probed with the indicated antibodies. Vinculin was included as a loading control.

Données de [ , , Cell Rep, 2014, 8(5):1475-83 ]

Wild-type fetal liver-derived cells were differentiated for 2 days in culture. Kinase inhibitors (A-674563 and RAF265; concentrations are listed in Materials and Methods) were added during the final 14 h of culture.

Données de [ , , Mol Cell Biol, 2016, 37(1) ]

Sellecks RAF265 (CHIR-265) A été cité par 24 Publications

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Comprehensive drug response profiling and pan-omic analysis identified therapeutic candidates and prognostic biomarkers for Asian cholangiocarcinoma [ iScience, 2022, 25(10):105182] PubMed: 36248745
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
B-Raf inhibitor vemurafenib counteracts sulfur mustard-induced epidermal impairment through MAPK/ERK signaling [ Drug Chem Toxicol, 2022, 1-10] PubMed: 34986718
RAF1 amplification drives a subset of bladder tumors and confers sensitivity to MAPK-directed therapeutics [ J Clin Invest, 2021, e147849] PubMed: 34554931
SHOC2 phosphatase-dependent RAF dimerization mediates resistance to MEK inhibition in RAS-mutant cancers. [ Nat Commun, 2019, 10(1):2532] PubMed: 31182717
RAF kinases are stabilized and required for dendritic cell differentiation and function. [ Cell Death Differ, 2019, 10.1038/s41418-019-0416-4] PubMed: 31541179
Genetic Heterogeneity of BRAF Fusion Kinases in Melanoma Affects Drug Responses. [ Cell Rep, 2019, 29(3):573-588] PubMed: 31618628
Mitochondrial metabolic reprograming via BRAF inhibition ameliorates senescence. [ Exp Gerontol, 2019, 126:110691] PubMed: 31421186

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