Temsirolimus (CCI-779)

N° de catalogueS1044 Lot :S104419

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Données techniques

Formule

C56H87NO16
Poids moléculaire 1030.29 Numéro CAS 162635-04-3
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (97.06 mM)
Ethanol 100 mg/mL (97.06 mM)
Water Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Le Temsirolimus est un inhibiteur spécifique de mTOR avec une IC50 de 1,76 μM dans un essai acellulaire. Le Temsirolimus induit l'Autophagy et l'Apoptosis.
Cibles
mTOR
(Cell-free assay)
1.76 μM
In vitro En l'absence de FKBP12, le Temsirolimus inhibe puissamment l'activité kinase de mTOR avec une IC50 de 1,76 μM, similaire à celle de la rapamycine avec une IC50 de 1,74 μM. Le traitement avec ce composé à des concentrations nanomolaires (10 nM à <5 μM) présente une activité antiproliférative modeste et sélective via un mécanisme dépendant de la FKBP12, mais peut complètement inhiber la prolifération d'un large panel de cellules tumorales à des concentrations micromolaires faibles (5-15 μM), impliquant une suppression indépendante de la FKBP12 de la signalisation mTOR. Ce traitement chimique à des concentrations micromolaires mais non nanomolaires (20 μM) provoque une diminution marquée de la synthèse globale des protéines et le désassemblage des polyribosomes, accompagné d'une augmentation rapide de la phosphorylation du facteur d'élongation de la traduction eEF2 et du facteur d'initiation de la traduction eIF2A. Il inhibe la phosphorylation de la protéine ribosomale S6, plus puissamment dans les cellules DU145 PTEN-positives que dans les cellules PC-3 PTEN-négatives, et inhibe la croissance cellulaire et la survie clonogénique des deux types de cellules de manière concentration-dépendante. Ce composé (100 ng/mL) inhibe puissamment la prolifération et induit l'apoptosis dans les cellules primaires de leucémie lymphoblastique humaine (ALL).
In vivo Dans les modèles de xénogreffe NOD/SCID avec ALL humaine, le traitement au Temsirolimus à 10 mg/kg/jour entraîne une diminution des blastes sanguins périphériques et de la splénomégalie . L'administration de ce composé (20 mg/kg i.p. 5 jours/semaine) retarde significativement la croissance des xénogreffes DAOY de 160 % après 1 semaine et de 240 % après 2 semaines, par rapport aux contrôles. Une dose unique élevée de ce produit chimique (100 mg/kg i.p) induit une régression de 37 % du volume tumoral en 1 semaine. Le traitement par ce composé pendant 2 semaines retarde également la croissance des xénogreffes U251 résistantes à la rapamycine de 148 %. L'inhibition de mTOR par cet agent améliore les performances dans quatre tâches comportementales différentes et diminue la formation d'agrégats dans un modèle murin de la maladie de Huntington. L'administration de ce composé induit des réponses antitumorales significatives et dose-dépendantes contre la croissance sous-cutanée des xénogreffes 8226, OPM-2 et U266 avec des ED50 de 20 mg/kg et 2 mg/kg pour 8226 et OPM-2, respectivement, qui sont associées à une prolifération et une angiogenèse inhibées, à l'induction de l'apoptosis et à une réduction de la taille des cellules tumorales.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Essai in vitro de l'activité catalytique de mTOR

    Les constructions d'ADN de mTOR humain de type sauvage marqué par Flag (Flag-mTOR) sont transfectées transitoirement dans des cellules HEK293. L'extraction des protéines et la purification de Flag-mTOR sont effectuées 48 heures plus tard. Des essais kinase in vitro de Flag-mTOR purifié en présence de diverses concentrations de Temsirolimus sans FKBP12 sont réalisés dans une plaque à 96 puits et détectés par dosage immunofluorométrique à amplification par dissociation des lanthanides (DELFIA) en utilisant His6-S6K1 comme substrat. Les enzymes sont d'abord diluées dans le tampon d'essai kinase (10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycérophosphate, 10 mM MnCl2, 0,5 mM DTT, 0,25 μM microcystine LR, et 100 μg/mL BSA). Dans chaque puits, 12 μL de l'enzyme diluée sont mélangés brièvement avec 0,5 μL de ce composé. La réaction kinase est initiée en ajoutant 12,5 μL de tampon d'essai kinase contenant de l'ATP et de His6-S6K pour donner un volume de réaction final de 25 μL contenant 800 ng/mL de FLAG-mTOR, 100 μM d'ATP et 1,25 μM de His6-S6K. La plaque de réaction est incubée pendant 2 heures (linéaire de 1 à 6 heures) à température ambiante avec une agitation douce, puis la réaction est arrêtée en ajoutant 25 μL de tampon d'arrêt (20 mM Hepes (pH 7,4), 20 mM EDTA et 20 mM EGTA). La détection DELFIA de His6-S6K phosphorylé (Thr-389) est effectuée à température ambiante en utilisant un anticorps monoclonal anti-P(T389)-p70S6K marqué à l'Europium-N1-ITC (Eu) (10,4 Eu par anticorps). 45 μL du mélange de réaction kinase stoppé sont transférés dans une plaque MaxiSorp contenant 55 μL de PBS. Le His6-S6K est laissé se fixer pendant 2 heures, après quoi les puits sont aspirés et lavés une fois avec du PBS. 100 μL de tampon DELFIA avec 40 ng/mL d'anticorps Eu-P(T389)-S6K sont ajoutés. La liaison de l'anticorps se poursuit pendant 1 heure avec une agitation douce. Les puits sont ensuite aspirés et lavés quatre fois avec du PBS contenant 0,05 % de Tween 20 (PBST). 100 μL de solution d'amélioration DELFIA sont ajoutés à chaque puits et les plaques sont lues dans un lecteur de plaques PerkinElmer Victor.
Test cellulaire :

[1]
  • Lignées cellulaires

    A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, and PC3-MM2

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~20 μM

  • Temps dincubation

    72 hours

  • Méthode

    Cells are exposed to various concentrations of Temsirolimus for 72 hours. After treatment, viable cell densities are determined by MTS dye conversion using CellTiter AQ assay kit.
Étude animale :

[4]
  • Modèles animaux

    Female athymic nude mice injected s.c. with DAOY, or U251 cells

  • Posologies

    20 mg/kg

  • Administration

    Injection daily 5 times per week

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18413763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15805283/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16195324/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11245461/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15146184/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15304393/

Validation du produit par le client

mTOR inhibitors attenuate ganetespib-driven elevation of HSPs in multiple tumor cell types. A375 melanoma cells were treated with vehicle, ganetespib (25 nmol/L), BEZ235 (500 nmol/L), or temsirolimus (500 nmol/L), either alone or in combination, for 24 hours. The levels of HSP90α, HSP70, HSP27, and GAPDH were determined by immunoblotting.

Données de [ Mol Cancer Res , 2014 , 12, 703-13 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered 25 mg/kg erlotinib once daily for 4 days or 50 mg/kg temsirolimus once from day 8. Four hours after final erlotinib administration, tumors were harvested, and the relative levels of proteins in the tumor lysates were determined by western blotting.

Données de [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered as described in Figure. Four hours after final administration of erlotinib, tumors were harvested, and tumor cell angiogenesis (CD31) were determined by immunohistochemistry.

Données de [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

<p>Breast cancer cells were pretreated with 100ng/ml EGF for 15 min and then treated with the indicated concentrations of Temsirolimus for 24 hours.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Temsirolimus (CCI-779) A été cité par 108 Publications

Haploinsufficiency of miR-143 and miR-145 reveal targetable dependencies in resistant del(5q) myelodysplastic neoplasm [ Leukemia, 2025, 39(4):917-928] PubMed: 40000845
Multi-layer stratified oncology platform utilizing transcriptomics, prostate cancer organoids, and modeling of drug response [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):290] PubMed: 41094672
PI3K/AKT signaling mediates stress-inducible amyloid formation through c-Myc [ Cell Rep, 2025, 44(5):115617] PubMed: 40272983
Lactate shuttle between cytotrophoblast and syncytiotrophoblast in the placenta enhances ferroptosis resistance and maintains placental homeostasis: implications for early pregnancy loss [ Cell Commun Signal, 2025, 23(1):438] PubMed: 41088442
Molecular control of PDPNhi macrophage subset induction by ADAP as a host defense in sepsis [ JCI Insight, 2025, e186456] PubMed: 39903516
A high-throughput screening platform to identify MYCN expression inhibitors for liver cancer therapy [ Front Oncol, 2025, 15:1486671] PubMed: 40027135
Single-Molecule-Based, Label-Free Monitoring of Molecular Glue Efficacies for Promoting Protein-Protein Interactions Using YaxAB Nanopores [ ACS Nano, 2024, 18(45):31451-31465] PubMed: 39482865
The mTOR pathway controls phosphorylation of BRAF at T401 [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):428] PubMed: 39223665
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Enzymatic depletion of circulating glutamine is immunosuppressive in cancers [ iScience, 2024, 27(6):109817] PubMed: 38770139

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