ZM 447439

In vitro, ZM-447439 inhibe sélectivement les Aurora A et B recombinantes humaines avec des valeurs d'IC50 de 110 et 130 nM, respectivement, tandis que d'autres protéines kinases de divers types structurels, y compris les kinases mitotiques CDK1 et PLK1, sont inhibées avec des valeurs d'IC50 >10 μM. [1] L'inhibiteur d'Aurora kinase, ZM-447439, inhibe la croissance des trois lignées cellulaires de manière dépendante du temps et de la dose avec des valeurs d'IC50 de 3 μM (BON), 0,9 μM (QGP-1) et 3 μM (MIP-101) après 72 heures d'exposition continue. De plus, ZM-447439 induit puissamment l'apoptose cellulaire en favorisant la fragmentation de l'ADN et l'activation des caspases 3 et 7, et arrête les cellules GEP-NET en phase G₀ /G₁ et G₂/M du Cell Cycle. [2] Chez l'embryon de souris, l'inhibition de l'activité d'Aurora kinase par ZM-447439 entraîne des anomalies pendant la mitose en régulant la phosphorylation de l'histone H3 sérine 10 (H3S10Ph) de la phase G2 à la métaphase avec des perturbations différentes à chaque cycle embryonnaire. [3] Une étude récente montre que ZM-447439 présente un effet inhibiteur de croissance et pro-apoptotique sur les cellules SiHa du cancer du col de l'utérus, et améliore la chimiosensibilité. [4]

• Tests kinase in vitro

  Les Aurora A et B recombinantes sont exprimées sous forme de protéines de fusion marquées His₆ à l'extrémité NH₂ en utilisant un système d'expression baculoviral. Aurora A est purifiée par chromatographie d'affinité en utilisant de l'agarose Ni-NTA, et Aurora B est purifiée par chromatographie d'échange d'ions en utilisant du CM Sepharose Fast Flow. 1 ng d'enzyme recombinante purifiée est ajouté à un cocktail de réaction contenant 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 12,5 mM KCl, 2,5 mM NaF, 0,6 mM DTT, 6,25 mM MnCl₂, 10 μM de substrat peptidique, 10 μM pour Aurora A ou 5 μM d'ATP pour Aurora B, et 0,2 μCi γ-[³³P]ATP (activité spécifique ≥2 500 Ci/mmol), puis est incubé à température ambiante pendant 60 minutes. Les réactions sont arrêtées par l'ajout d'acide phosphorique à 20 %, et les produits sont capturés sur des filtres de nitrocellulose P30 et analysés pour l'incorporation de ³³P avec un compteur Betaplate^TM. Aucune enzyme et aucune valeur de contrôle de composé ne sont utilisées pour déterminer la concentration de ZM447439, qui a donné 50 % d'inhibition de l'activité enzymatique. Des détails supplémentaires sont disponibles sur demande auprès de Nicholas Keen.

• Lignées cellulaires

  BON, QGP-1 and MIP-101 cells

• Concentrations

  0-5 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cell number is evaluated by crystal violet staining. In brief, cells in 96-well plates are fixed with 1% glutaraldehyde. Then cells are stained with 0.1% crystal violet. The unbound dye is removed by washing with water. Bound crystal violet is solubilized with 0.2% Triton X-100. Light extinction which increases linearly with the cell number is analyzed at 570 nm using an ELISA reader.