SB203580 (Adezmapimod)

L'Adezmapimod (SB203580) inhibe la prolifération des lymphocytes T humains primaires, des lymphocytes T murins CT6 ou des lymphocytes B BAF F7 induite par l'IL-2 avec une IC50 de 3 à 5 μm. Il inhibe également l'activation de la p70S6 kinase induite par l'IL-2, bien que la concentration requise soit légèrement plus élevée avec une IC50 supérieure à 10 μm. Ce composé inhibe l'activité de la PDK1 de manière dose-dépendante avec une IC50 comprise entre 3 et 10 μm. [1] Il inhibe la stimulation de la MAPKAPK2 par la p38-MAPK avec une IC50 d'environ 0,07 μM, tandis que l'activité totale de SAPK/JNK est inhibée avec une IC50 de 3 à 10 μM. À des concentrations plus élevées, il active la voie ERK, ce qui améliore par la suite l'activité transcriptionnelle de NF-κB. [2] Il induit également l'autophagie dans les cellules de carcinome hépatocellulaire (CHC) humain. [3]

L'Adezmapimod (SB203580) protège le myocarde porcin contre les lésions ischémiques dans un modèle in vivo. [4]Il est également efficace pour prévenir et traiter la maladie dans le modèle murin MRL/lpr du lupus érythémateux systémique (LES). [5]

• Essai de phosphorylation de la kinase des récepteurs cellulaires

  4 μg d'anti-PKBα de mouton sont immobilisés sur 25 μL de protéine G-Sepharose pendant une nuit (ou 1,5 heure) et lavés dans le tampon A (50 mm Tris, pH 7,5, 1 mm EDTA, 1 mm EGTA, 0,5 mm Na₃VO₄, 0,1 % β-mercaptoéthanol, 1 % Triton X-100, 50 mm fluorure de sodium, 5 mm pyrophosphate de sodium, 0,1 mm fluorure de phénylméthylsulfonyle, 1 μg/mL de pepstatin, leupeptin et 1 μm de microcystine). L'anti-PKB immobilisé est ensuite incubé avec 0,5 mL de lysat (provenant de 5 × 10⁶ cellules) pendant 1,5 heure et lavé trois fois dans 0,5 mL de tampon A supplémenté avec 0,5 m NaCl, deux fois dans 0,5 mL de tampon B (50 mm Tris-HCl, pH 7,5, 0,03 % (p/v) Brij-35, 0,1 mm EGTA et 0,1 % β-mercaptoéthanol), et deux fois avec 100 μL de tampon de dilution pour essai ; le tampon de dilution 5× est composé de 100 mm MOPS, pH 7,2, 125 mm β-glycérophosphate, 25 mm EGTA, 5 mm orthovanadate de sodium, 5 mm DTT. Au complexe immun de l'enzyme PKB sont ajoutés 10 μL de tampon de dilution pour essai, 40 μm de peptide inhibiteur de protéine kinase A, 100 μm de peptide substrat spécifique de la PKB et 10 μCi de [γ-³²P]ATP, tous préparés dans le tampon de dilution pour essai. La réaction est incubée pendant 20 minutes à température ambiante avec agitation, puis les échantillons sont centrifugés par impulsions, et 40 μL du volume de réaction sont retirés dans un autre tube auquel sont ajoutés 20 μL d'acide trichloroacétique à 40 % pour arrêter la réaction. Ceci est mélangé et incubé pendant 5 minutes à température ambiante, et 40 μL sont transférés sur du papier phosphocellulose P81 et laissés se lier pendant 30 secondes. Le morceau de P81 est lavé trois fois dans de l'acide phosphorique à 0,75 %, puis dans de l'acétone à température ambiante. L'incorporation de γ-³²P est ensuite mesurée par comptage par scintillation.

• Lignées cellulaires

  CT6 cell , BA/F3 F7 cell

• Concentrations

  0–30 μM

• Temps dincubation

  1 hour

• Méthode

  CT6 cell and BA/F3 F7 cell are rested by washing three times in RPMI and culturing overnight in RPMI, 5% fetal calf serum in the absence of growth factor, antibiotics, or β-mercaptoethanol supplements. 2–5 × 10⁶ rested CT6 cells are resuspended in 2 mL of RPMI, 5% fetal calf serum and preincubated with Adezmapimod (SB203580) or vehicle control as indicated in figure legends. Cells are then stimulated with 20 ng/ml recombinant human IL-2 for 5 minutes at 37  °C and pelleted in a minifuge for 30 seconds, medium is aspirated, and the pellet is lysed in the appropriate buffer. BA/F3 cells stably expressing deletion mutants of IL-2 receptor β chain are maintained in glutamine containing RPMI further supplemented with 5% fetal calf serum and 0.2 μg/mL G418. The cells are then washed extensively, rested overnight, and washed again before activating with IL-2; such cell preparations are >90% T cells. Cellular proliferation assays are performed by measurement of [³H]thymidine incorporation.

• Modèles animaux

  Systemic lupus erythematosus (SLE) are established in female MRL/lpr mice and female C57BL/6 mice

• Posologies

  0.1 M/day

• Administration

  Orally administered