Afatinib Dimaleate

N° de catalogueS7810 Lot :S781004

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Données techniques

Formule

C24H25ClFN5O3.2C4H4O4
Poids moléculaire 717.18 Numéro CAS 850140-73-7
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (139.43 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Afatinib Dimaleate inhibe irréversiblement EGFR/HER2, y compris EGFR(wt), EGFR(L858R), EGFR(L858R/T790M) et HER2 avec des IC50 de 0,5 nM, 0,4 nM, 10 nM et 14 nM, respectivement ; 100 fois plus actif contre le mutant L858R-T790M EGFR résistant au Gefitinib. Afatinib (BIBW2992) Dimaleate induit l'autophagy.
Cibles
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 10 nM 14 nM
In vitro Le BIBW2992 est plus efficace que l'erlotinib, le géfitinib ou le lapatinib pour inhiber la survie des lignées cellulaires de cancer du poumon hébergeant l'EGFR de type sauvage (H1666) ou L858R/T790M (NCI-H1975). Le BIBW2992 est également efficace contre les lignées de CPNPC exprimant HER2 776insV (NCI-H1781) ou EGFR E746_A750del (HCC827), mais ne montre aucune activité envers les cellules A549, qui expriment l'EGFR et le HER2 de type sauvage. L'Afatinib améliore la cytotoxicité du topotécane et du mitoxantrone envers les cellules SP, et augmente l'apoptose induite par le topotécane et le mitoxantrone dans les cellules SP.
In vivo Dans le modèle de xénogreffe MDA-MB-453, le BIBW2992 (20 mg/kg, p.o.) entraîne une régression tumorale spectaculaire avec un rapport volume tumoral traité/témoin (rapport T/C) cumulatif de 2 %, et une régulation à la baisse de la phosphorylation de l'EGFR et de l'AKT. Dans les modèles de xénogreffe A7, A431, FaDu, UT-SCC-14 et UT-SCC-15, l'application de BIBW 2992 (30 mg/kg, p.o.) entraîne une prolongation significative du temps de croissance tumorale. Dans le modèle de xénogreffe amplifié HER2, l'Afatinib (30 mg/kg, p.o.) entraîne une inhibition marquée de la croissance tumorale et une amélioration significative de la durée de la survie globale. Dans la xénogreffe NCI-N87 de cancer gastrique HER2-positif, l'afatinib (25 mg/kg, p.o.) entraîne une régression spectaculaire du volume tumoral en 4 jours et une résolution tumorale quasi complète après 21 jours de traitement.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Essai d'activité kinase in vitro

    EGFR kinase : Chaque réaction enzymatique de 100 µL contenait 10 μL d'inhibiteur dans 50 % de Me2SO, 20 μL de solution de substrat (200 mM HEPES pH 7,4, 50 mM Mg-acétate, 2,5 mg/mL de poly (EY), 5 μg/mL de bio-pEY) et 20 µL de préparation enzymatique. La réaction enzymatique est démarrée par l'ajout de 50 µL d'une solution d'ATP 100 µM préparée dans 10 mM MgCl2. Les essais sont réalisés à température ambiante pendant 30 min et terminés par l'ajout de 50 µL de solution d'arrêt (250 mM EDTA dans 20 mM HEPES pH 7,4). 100 µL sont transférés dans une plaque de microtitration recouverte de streptavidine, après un temps d'incubation de 60 min à température ambiante, la plaque est lavée avec 200 µL de solution de lavage (50 mM Tris, 0,05 % Tween20). Une aliquote de 100 µL d'un anticorps anti-PY marqué à la HRPO (PY20H Anti-Ptyr:HRP) à 250 ng/mL est ajoutée aux puits. Après 60 min d'incubation, la plaque est lavée trois fois avec 200 µL de solution de lavage. Les échantillons sont ensuite développés avec 100 µL de solution de TMB peroxydase (A:B= 1:1). La réaction est arrêtée après 10 min. La plaque est transférée à un lecteur ELISA et l'extinction est mesurée à OD450nm. Enzyme HER2-IC : L'activité enzymatique est testée en présence ou en absence de dilutions sérielles d'inhibiteur réalisées dans 50 % de Me2SO. Chaque réaction de 100 µL contient des composants similaires à ceux décrits pour l'essai de la kinase EGFR avec l'ajout de 1000 µM de Na3VO4. La réaction enzymatique est démarrée par l'ajout de 50 µL de solution d'ATP 500 µM préparée dans 10 mM de Mg-acétate. La dilution de l'enzyme est réglée de manière à ce que l'incorporation de phosphate dans le bio-pEY soit linéaire par rapport au temps et à la quantité d'enzyme. La préparation enzymatique est diluée dans 20 mM HEPES pH 7,4, 130 mM NaCl, 0,05 % Triton X-100, 1 mM DTT et 10 % de glycérol. Les essais sont réalisés à température ambiante pendant 30 min et terminés par l'ajout de 50 µL de solution d'arrêt. Essais de la kinase Src : Chaque réaction de 100 µL contenait 10 µL d'inhibiteur dans 50 % de Me2SO, 20 µL de préparation enzymatique, 20 µL de solution de substrat supplémentée avec 1000 µM de Na3VO4. La réaction enzymatique est démarrée par l'ajout de 50 µL d'une solution d'ATP 1000 µM préparée dans 10 mM de Mg-acétate. Essai de la kinase BIRK : 250 mM Tris pH 7,4, 10 mM DTT, 2,5 mg/mL de poly(EY), 5 mg/mL de bio-pEY est utilisé comme solution de substrat et la réaction enzymatique est démarrée par l'ajout de 50 µL d'une solution d'ATP 2 mM préparée dans 8 mM MnCl2, 20 mM Mg-acétate. Essais de la kinase VEGF2 et HGFR : Les essais sont réalisés à température ambiante pendant 20 minutes et terminés par l'ajout de 10 µL de 5 % H3PO4. Le précipité est ensuite piégé sur des filtres GF/B à l'aide d'un collecteur universel à 96 puits. Après un lavage approfondi, la plaque de filtration est séchée pendant 1 h à 50 °C, scellée et la radioactivité incorporée est déterminée par comptage par scintillation à l'aide d'un TopCount™ ou d'un Microbeta b counter™.
Test cellulaire :[2]
  • Lignées cellulaires

    SP and NSP cell lines

  • Concentrations

    1 μM

  • Temps dincubation

    48 h

  • Méthode

    Cytotoxicity is determined using MTT assay. The IC 50 value is defined as the drug concentration resulting in 50% cell death. Both the fitted sigmoidal dose response curve and IC50 are calculated by Bliss method.
Étude animale :[4]
  • Modèles animaux

    SCID mice harbouring ARK2 xenografts

  • Posologies

    25 mg/kg

  • Administration

    p.o.

Références

  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2748240/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24972892/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25444177/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25268372/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23578997/

Validation du produit par le client

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Données de [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Données de [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

(F) Stably transduced MCF10A cells were treated with the indicated drugs at 100 nM for 4 h in EGF- and serum-free media. Cell lysates were subjected to immunoblot analyses with the indicated antibodies.

Données de [ , , Cancer Discov, 2017, 7(6):575-585 ]

Immunoblotting of lysates from EGFR L858R and EGFR L858M/L861Q NIH-3T3 cells treated with the indicated concentrations of gefitinib, osimertinib, or afatinib. The ratio of phospho-EGFR in treated vs. untreated samples was quantified by densitometry for each cell line.

Données de [ , , J Thorac Oncol, 2017, 12(5):884-889 ]

Sellecks Afatinib Dimaleate A été cité par 173 Publications

Human fetal brain self-organizes into long-term expanding organoids [ Cell, 2024, 187(3):712-732.e38] PubMed: 38194967
Clinical efficacy and identification of factors confer resistance to afatinib (tyrosine kinase inhibitor) in EGFR-overexpressing esophageal squamous cell carcinoma [ Signal Transduct Target Ther, 2024, 9(1):153] PubMed: 38937446
Romidepsin and afatinib abrogate JAK-STAT signaling and elicit synergistic antitumor effects in cutaneous T-cell lymphoma [ J Invest Dermatol, 2024, S0022-202X(23)03210-4] PubMed: 38219917
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
HB-EGF activates EGFR to induce reactive neural stem cells in the mouse hippocampus after seizures [ Life Sci Alliance, 2024, 7(9)e202201840] PubMed: 38977310
Discovery of nontriterpenoids from the rot roots of Panax notoginseng with cytotoxicity and their molecular docking study and experimental validation [ RSC Adv, 2023, 13(16):11037-11043] PubMed: 37033442
Irreversible tyrosine kinase inhibitors induce the endocytosis and downregulation of ErbB2 [ Biochem Biophys Rep, 2023, 34:101436] PubMed: 36824069
Silent mutations reveal therapeutic vulnerability in RAS Q61 cancers [ Nature, 2022, 603(7900):335-342] PubMed: 35236983
Group 3 innate lymphoid cells produce the growth factor HB-EGF to protect the intestine from TNF-mediated inflammation [ Nat Immunol, 2022, 23(2):251-261] PubMed: 35102343
PI3Kγ stimulates a high molecular weight form of myosin light chain kinase to promote myeloid cell adhesion and tumor inflammation [ Nat Commun, 2022, 13(1):1714] PubMed: 35361816

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