Alisertib (MLN8237)

N° de catalogueS1133 Lot :S113310

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Données techniques

Formule

C27H20ClFN4O4
Poids moléculaire 518.92 Numéro CAS 1028486-01-2
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (192.7 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description L'Alisertib (MLN8237) est un inhibiteur sélectif de l'Aurora A avec une IC50 de 1,2 nM dans un essai acellulaire, et il présente une sélectivité >200 fois supérieure pour Aurora A que pour Aurora B. Ce composé induit un arrêt du cycle cellulaire, l'apoptose et l'autophagie. Phase 3.
Cibles
Aurora A
(Cell-free assay)
1.2 nM
In vitro

L'Alisertib (MLN8237) présente une sélectivité >200 fois supérieure pour Aurora A que pour l'Aurora B structurellement apparentée, avec une IC50 de 396,5 nM, et n'a pas d'activité significative contre 205 autres kinases. Le traitement avec ce composé (0,5 μM) inhibe la phosphorylation d'Aurora A dans les cellules MM1.S et OPM1, sans affecter la phosphorylation de l'histone H3 médiée par Aurora B. Il inhibe significativement la prolifération cellulaire dans les lignées cellulaires de myélome multiple (MM) avec des valeurs d'IC50 de 0,003-1,71 μM, et présente une activité anti-prolifération plus puissante contre les cellules MM primaires et les lignées cellulaires MM en présence de cellules stromales de la moelle osseuse, ainsi que d'IL-6 et d'IGF-1 que contre les cellules MM seules. À 0,5 μM, il induit une augmentation de 2 à 6 fois de la phase G2/M dans les cellules MM primaires et les lignées cellulaires, ainsi qu'une apoptose et une sénescence significatives, impliquant la régulation positive de p53, p21 et p27, ainsi que le clivage de PARP, caspase 3 et caspase 9. De plus, il montre un fort effet anti-MM synergique avec l'hexadécadrol, ainsi qu'un effet additif avec la doxorubicine et le LDP-341. Ce composé (0,5 μM) provoque l'inhibition de la formation de colonies des lignées cellulaires d'adénocarcinome œsophagien FLO-1, OE19 et OE33, et induit une augmentation significative du pourcentage de cellules polyploïdes, puis une augmentation du pourcentage de cellules en phase sub-G1, qui peut être davantage améliorée en combinaison avec le NSC 119875 (2,5 μM), impliquant une induction plus élevée de TAp73β, PUMA, NOXA, la caspase-3 clivée et le PARP clivé par rapport à un traitement à agent unique.

In vivo

L'Alisertib (MLN8237) réduit significativement la charge tumorale avec une inhibition de la croissance tumorale (TGI) de 42% et 80% à 15 mg/kg et 30 mg/kg, respectivement, et prolonge la survie des souris par rapport au contrôle.

Caractéristiques Premier inhibiteur oralement disponible de l'Aurora A.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Essai enzymatique radioactif Flashplate d'Aurora A

    Un essai enzymatique radioactif Flashplate d'Aurora A est réalisé pour déterminer la nature et le degré d'inhibition médiés par l'Alisertib (MLN8237) in vitro. L'Aurora A recombinante est exprimée dans des cellules Sf9 et purifiée par chromatographie d'affinité GST. Le substrat peptidique pour Aurora A est conjugué à la biotine (Biotin-GLRRASLG). L'Aurora A kinase (5 nM) est dosée dans 50 mM Hepes (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0,05% Tween 20, 2 μM de substrat peptidique, 3,3 μCi/mL [γ-33P]ATP à 2 μM, et des concentrations croissantes de ce composé en utilisant des Image FlashPlates.
Test cellulaire :

[2]
  • Lignées cellulaires

    MM1.S, MM.1R, LR5, RPMI 8226, DOX40, OPM1, OPM2, INA6, and U266

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Temps dincubation

    24, 48, and 72 hours

  • Méthode

    Cells are exposed to various concentrations of Alisertib (MLN8237) for 24, 48, and 72 hours. Cell viability is measured using MTT assay, and cell proliferation is measured using 3[H]-thymidine incorporation. For cell cycle analysis, cells are permeabilized by 70% ethanol at -20 °C, and incubated with 50 μg/mL PI and 20 units/mL RNase-A. DNA content is analyzed by flow cytometry using BDFACS-Canto II and FlowJo software. For the detection of apoptosis and senescence, cells are stained with Resorcinolphthalein isothiocyanate-annexin V and PI. Apoptotic cells are determined by flow cytometric analysis using BDFACS-Canto II and FlowJo software.
Étude animale :

[2]
  • Modèles animaux

    Severe combined immune-deficient (SCID) mice inoculated subcutaneously with MM1.S cells

  • Posologies

    ~30 mg/kg/day

  • Administration

    Orally

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22016509/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20382844/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22302096/

Validation du produit par le client

<p>Alisertib inhibits AURKA and AURKB in a concentration-dependent manner. (a) Alisertib induces G 2 /M delay or genome reduplication. HeLa cells were exposed to buffer or the indicated concentrations of Alisertib. After 24 h, the cells were harvested and analyzed with flow cytometry. The positions of 2N, 4N and 8N DNA contents are indicated. (b) Alisertib delays mitotic exit or induces slippage. HeLa cells stably expressing histone H2B-GFP were exposed to buffer or the indicated concentrations of Alisertib. Individual cells were then tracked for 24 h with time-lapse microscopy. Each horizontal bar represents one cell (n ¼ 50). Key: light gray ¼ interphase; black ¼ mitosis (from DNA condensation to anaphase or mitotic slippage); dark gray ¼ interphase after mitotic slippage; truncated bars ¼ cell death. (c) Different concentrations of Alisertib are involved in delaying mitotic exit and inducing slippage. Live-cell imaging of cells treated with Alisertib was described in panel (b). The duration of mitosis (mean±90% confidence interval) and the percentage of cells that underwent mitotic slippage during the imaging period was quantified. (d) Alisertib promotes apoptosis in a concentration-dependent manner. HeLa cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 48 h. The cells were then harvested and analyzed with flow cytometry. (e) Concentration-dependent cytotoxicity of Alisertib. HeLa cells were cultured in the presence of the indicated concentrations of Alisertib for 48 h. The number of live and dead cells was analyzed with trypan blue exclusion assay. (f) Concentration-dependent suppression of long-term survival by Alisertib. HeLa cells were seeded on 60-mm culture plates and grown in the presence of 250 n M or 1 m M of Alisertib. After 24 h, the cells were washed gently and propagated in normal medium for another 10–12 days. Colonies were fixed and stained with crystal violet solution (examples of the plates are shown). Average±s.d. from three independent experiments. (g) Both AURKA and AURKB are inhibited by Alisertib.Mitotic HeLa cells were obtained by exposure to nocodazole for 16 h followed by mechanical shake off. The cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 2 h. Lysates were then prepared and activated phospho-AURKAThr288 and AURKBThr232were detected with immunoblotting. The asterisk indicates the position of an AURKB-like protein (the same throughout this study). Uniform loading was confirmed by immunoblotting for actin. In this assay, nocodazole and MG132 (a proteasome inhibitor) were added to prevent the cells from exiting mitosis. Accordingly, the total AURKA and AURKB levels remained constant throughout the experiment. (h) Alisertib prevents activation of AURKA and AURKB. HeLa cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 8 h. Nocodazole was then added for another 6 h to trap cells that entered mitosis. Lysates were prepared and analyzed with immunoblotting. Actin analysis was included to assess loading and transfer.</p>

Données de [ Oncogene , 2014 , 33, 3550-60 ]

Tissue levels of 53BP1, a-tubulin, IkB-a and IL-6 in an Hs294T xenograft treated with MLN8237 or vehicle control were visualized by immunofluorescence co-staining with DAPI. Representative micrographs are shown from triplicate experiments.

Données de [ EMBO Mol Med , 2013 , 5(1), 149-66 ]

Inhibition of Aurka kinase activity by MLN8237 impairs expression of pluripotency genes in CCE cells as measured by qRT-PCR. All values shown are mean ?SEM for n=3. The level of phosphorylated H3(S10) (p-H3(S10)), an Aurka phosphorylation target site, is decreased in MLN8237-treated samples.

Données de [ Cell Stem Cell , 2012 , 11, 179-94 ]

<p>Recruitment of clathrin to the mitotic spindle is controlled by phosphorylation of TACC3 by Aurora-A kinase. Representative micrographs of HEK293 cells incubated with 0.3 μM MLN8237 for 40 min. Cells were fixed and stained as indicated.</p>

Données de [ EMBO J , 2012 , 30, 906-19 ]

Sellecks Alisertib (MLN8237) A été cité par 380 Publications

Centromere protection requires strict mitotic inactivation of the Bloom syndrome helicase complex [ Nat Commun, 2025, 16(1):7832] PubMed: 40846865
Aurora A regulates the material property of spindle poles to orchestrate nuclear organization at mitotic exit [ EMBO J, 2025, 10.1038/s44318-025-00564-4] PubMed: 40940421
Targeted inhibition of Aurora kinase A promotes immune checkpoint inhibition efficacy in human papillomavirus-driven cancers [ J Immunother Cancer, 2025, 13(1)e009316] PubMed: 39773561
An Aurora kinase A-BOD1L1-PP2A B56 axis promotes chromosome segregation fidelity [ Cell Rep, 2025, 44(2):115317] PubMed: 39970043
The AURKA inhibitor alters the immune microenvironment and enhances targeting B7-H3 immunotherapy in glioblastoma [ JCI Insight, 2025, e173700] PubMed: 39928563
CDK1-mediated phosphorylation of LDHA fuels mitosis through LDHB-dependent lactate oxidation [ EMBO Rep, 2025, 10.1038/s44319-025-00573-8] PubMed: 40940446
Cellular senescence as a prognostic marker for predicting breast cancer progression in 2D and 3D organoid models [ Biomed Pharmacother, 2025, 189:118324] PubMed: 40616881
Actionable heterogeneity of hepatocellular carcinoma therapy-induced senescence [ Cancer Immunol Immunother, 2025, 74(7):207] PubMed: 40374812
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023] PubMed: 40795355
O 6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT) expression in U1242 glioblastoma cells enhances in vitro clonogenicity, tumor implantation in vivo, and sensitivity to alisertib-carboplatin combination treatment [ Front Cell Neurosci, 2025, 19:1552015] PubMed: 40336841

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