Alvespimycin (17-DMAG) Hydrochloride

Le 17-DMAG affiche une puissance environ 2 fois supérieure contre la Hsp90 humaine par rapport au 17-AAG, avec une IC50 de 62 nM contre 119 nM. Dans les cellules SKBR3 et SKOV3 qui surexpriment la protéine cliente Hsp90 Her2, le 17-DMAG provoque une régulation négative de Her2 avec des EC50 de 8 nM et 46 nM, respectivement, ainsi qu'une induction de Hsp70 avec des EC50 de 4 nM et 14 nM, respectivement, conduisant à une cytotoxicité significative avec des GI50 de 29 nM et 32 nM, respectivement, ce qui est cohérent avec l'inhibition de Hsp90. [1] Le 17-DMAG en combinaison avec le vorinostat induit synergiquement l'apoptose des cellules de LCM cultivées ainsi que des cellules de LCM primaires, plus puissamment que chaque agent seul, en atténuant de manière significative les niveaux de cycline D1 et CDK4, ainsi que de c-Myc, c-RAF et Akt. [3] Contrairement au 17-AAG qui n'est actif que pour IKKβ dans les cellules de leucémie lymphoïde chronique (LLC), le traitement au 17-DMAG entraîne efficacement l'épuisement de la protéine cliente Hsp90, ce qui réduit la liaison à l'ADN de NF-κB p50/p65, diminue la transcription du gène cible de NF-κB et l'apoptose dépendante de la caspase. En ciblant la famille NF-κB, le 17-DMAG médiatise sélectivement une cytotoxicité dose- et temps-dépendante contre les cellules de LLC, mais pas contre les cellules T normales ou les cellules NK importantes pour la surveillance immunitaire. [5]

Un traitement au 17-DMAG à 5 mg/kg ou 25 mg/kg trois fois par semaine réduit significativement la croissance tumorale des xénogreffes TMK-1, en réduisant significativement la surface vasculaire et le nombre de cellules tumorales proliférantes dans les coupes. [2] Conformément à l'inhibition de la signalisation FAK in vivo, le traitement au 17-DMAG à 25 mg/kg trois fois par semaine supprime significativement la croissance tumorale et la métastase des xénogreffes ME180 et SiHa chez la souris. [4] L'administration de 17-DMAG à 10 mg/kg pendant 16 jours diminue significativement le nombre de globules blancs et prolonge la survie dans un modèle de souris transplanté TCL1-SCID. [5]

• Test de liaison compétitive basé sur la polarisation de fluorescence (FP)

  Ce test utilise un analogue de la geldanamycine marqué au difluorure de bore-dipyrrométhène (BODIPY-AG) comme sonde et mesure la polarisation de fluorescence lors de la liaison de la sonde à une protéine. La protéine Hsp90 humaine native (isoformes α + β) est isolée des cellules HeLa. La solution de BODIPY-AG est fraîchement préparée dans le tampon d'essai FP (20 mM HEPES-KOH, pH 7,3, 1,0 mM EDTA, 100 mM KCl, 5,0 mM MgCl₂, 0,01 % NP-40, 0,1 mg/mL de γ-globuline bovine (BGG) fraîche, 1,0 mM de DTT frais, et un inhibiteur de protéase provenant d'une solution stock dans le DMSO. Des courbes de compétition sont obtenues en mélangeant 10 μL de chaque solution contenant du BODIPY-AG et Hsp90, et une dilution en série de 17-DMAG fraîchement préparée dans le tampon d'essai FP à partir d'une solution stock dans le DMSO. Les concentrations finales sont de 10 nM BODIPY-AG, 40 ou 60 nM Hsp90, des concentrations variables de 17-DMAG (0,10 nM-10 μM), et ≤0,25 % de DMSO dans une microplaque de 384 puits. Après 3 heures d'incubation à 30 °C, l'anisotropie de fluorescence (γ_Ex = 485 nm, γ_Em = 535 nm) est mesurée sur un lecteur de plaques multifonctions EnVision 2100. La valeur IC50 du 17-DMAG est obtenue à partir des courbes de compétition.

• Lignées cellulaires

  Chronic lymphocytic leukemia (CLL)

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Temps dincubation

  24, or 48 hours

• Méthode

  Cells are exposed to various concentrations of 17-DMAG for 24, or 48 hours. For the assessment of cytotoxicity, MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 24 hours before spectrophotometric measurement. Apoptosis is determined by staining with annexin isothiocyanate and propidium iodide (PI).

• Modèles animaux

  SCID mice engrafted with TCL1 leukemia cells

• Posologies

  10 mg/kg

• Administration

  Intraperitoneal injection 5 times per week