Spebrutinib (AVL-292)

N° de catalogueS7173 Lot :S717302

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Données techniques

Formule

C₂₂H₂₂FN₅O₃

Poids moléculaire

423.44

Numéro CAS

1202757-89-8

Solubilité (25°C)*

In vitro

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	4.250mg/ml (10.04mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 85 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	0.530mg/ml (1.25mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Activité biologique

Description

Spebrutinib (AVL-292) est un inhibiteur de BTK covalent, oralement actif et hautement sélectif avec une IC50 de <0,5 nM, montrant une sélectivité d'au moins 1400 fois supérieure aux autres kinases testées. Il est en phase 1.

Cibles

BTK
(Cell-free assay)

<0.5 nM

In vitro

Le Spebrutinib (AVL-292) présente une inhibition dose-dépendante de Btk avec une EC50 de 8 nM et des composants de signalisation BCR en aval dans les cellules Ramos. En inhibant les activités de BTK, il inhibe en outre la prolifération des cellules B avec une EC50 de 3 nM.

In vivo

Dans un modèle murin d'arthrite induite par le collagène, le Spebrutinib (AVL-292) (3-30 mg/kg, p.o.) inhibe de manière dose-dépendante les signes cliniques de la maladie inflammatoire, y compris la réduction de l'enflure des articulations et des pattes et la rougeur visible des pattes affectées.

Caractéristiques

Inhibiteur sélectif de BTK biodisponible par voie orale qui a été testé dans des essais cliniques de phase I pour le traitement du B-NHL, de la LLC et de la WM en rechute ou réfractaires.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[2]}	Procédures pour l'essai BTK OMNIA L'essai de lecture continue Omnia est réalisé essentiellement comme décrit par le fournisseur. Les conditions de l'essai sont: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox et 10 nM d'enzyme BTK. En bref, un mélange de substrat contenant 1,13X ATP et le substrat Y5 Sox est d'abord préparé dans un tampon de réaction kinase Omnia (KRB) 1X composé de 20 mM Tris, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-glycérophosphate, 5% de glycérol et 0,2 mM DTT. Pour les mesures d'IC50 du Spebrutinib (AVL-292), 5 μL d'enzyme sont incubés avec des composés dilués en série (3 fois) préparés dans 50% de DMSO dans une microplaque Corning (#3574) de 384 puits, blanche, à surface non-liante à 25°C pendant 30 min. Les réactions de kinase sont initiées par l'ajout de 45 μL du mélange ATP/substrat Y5 et suivies à λex360/λem485 dans un lecteur de plaques Synergy 4 pendant 60 minutes. Les courbes de progression de chaque puits sont examinées pour la cinétique de réaction linéaire et les statistiques d'ajustement. La vitesse initiale de chaque réaction est déterminée à partir de la pente d'un graphique des unités de fluorescence relative en fonction du temps, puis tracée en fonction de la concentration de l'inhibiteur pour estimer l'IC50 à l'aide du modèle Pente Variable, Réponse dans GraphPad Prism de GraphPad Software.
Test cellulaire :^{^[2]}	Lignées cellulaires Human B cells Concentrations ~1000 nM Temps dincubation 72 hours Méthode A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Test kinase :^{^[2]}

Procédures pour l'essai BTK OMNIA
L'essai de lecture continue Omnia est réalisé essentiellement comme décrit par le fournisseur. Les conditions de l'essai sont: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox et 10 nM d'enzyme BTK. En bref, un mélange de substrat contenant 1,13X ATP et le substrat Y5 Sox est d'abord préparé dans un tampon de réaction kinase Omnia (KRB) 1X composé de 20 mM Tris, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-glycérophosphate, 5% de glycérol et 0,2 mM DTT. Pour les mesures d'IC50 du Spebrutinib (AVL-292), 5 μL d'enzyme sont incubés avec des composés dilués en série (3 fois) préparés dans 50% de DMSO dans une microplaque Corning (#3574) de 384 puits, blanche, à surface non-liante à 25°C pendant 30 min. Les réactions de kinase sont initiées par l'ajout de 45 μL du mélange ATP/substrat Y5 et suivies à λex360/λem485 dans un lecteur de plaques Synergy 4 pendant 60 minutes. Les courbes de progression de chaque puits sont examinées pour la cinétique de réaction linéaire et les statistiques d'ajustement. La vitesse initiale de chaque réaction est déterminée à partir de la pente d'un graphique des unités de fluorescence relative en fonction du temps, puis tracée en fonction de la concentration de l'inhibiteur pour estimer l'IC50 à l'aide du modèle Pente Variable, Réponse dans GraphPad Prism de GraphPad Software.

Test cellulaire :^{^[2]}

Lignées cellulaires
Human B cells
Concentrations
~1000 nM
Temps dincubation
72 hours
Méthode
A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Références

http://www.celgene.com/pdfs/2011_ASH_AVL-292.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23709115/

Validation du produit par le client

: , , Allergy, 2017, 72(11):1666-1676

: , , J Biomol Screen, 2015, 20(7):876-886.

Sellecks Spebrutinib (AVL-292) A été cité par 12 Publications

Temporal mapping and pharmacological manipulation of signaling architecture of Tyrosine kinases in Traumatic Brain Injury (TBI) [ oparu, 2023, 10.18725/OPARU-47820]	PubMed: None
Surface-associated antigen induces permeabilization of primary mouse B-cells and lysosome exocytosis facilitating antigen uptake and presentation to T-cells [ Elife, 2021, 10e66984]	PubMed: 34704555
Assessment of the effects of Syk and BTK inhibitors on GPVI-mediated platelet signaling and function [ Am J Physiol Cell Physiol, 2021, 320(5):C902-C915]	PubMed: 33689480
Combining ibrutinib and checkpoint blockade improves CD8+ T-cell function and control of chronic lymphocytic leukemia in Em-TCL1 mice. [ Haematologica, 2020, 10.3324/haematol.2019.238154]	PubMed: 32139435
Differential impact of BTK active site inhibitors on the conformational state of full-length BTK [ Elife, 2020, 9e60470]	PubMed: 33226337
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, 51]	PubMed: N/A
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, None]	PubMed: None
Inhibition of Bruton's Tyrosine Kinase Modulates Microglial Phagocytosis: Therapeutic Implications for Alzheimer's Disease [ J Neuroimmune Pharmacol, 2019, 10.1007/s11481-019-09839-0]	PubMed: 30758770
Improving CLL Vγ9Vδ2-T-cell fitness for cellular therapy by ex vivo activation and ibrutinib [ Blood, 2018, 132(21):2260-2272]	PubMed: 30213872
BTK inhibition is a potent approach to block IgE-mediated histamine release in human basophils. [Smiljkovic D, et al. Allergy, 2017, 10.1111/all.13166]	PubMed: 28328081

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