AZ 628

AZ628 prévient l'activation d'un certain nombre de protéines tyrosines kinases, y compris VEGFR2, DDR2, Lyn, Flt1, FMS et d'autres. AZ628 supprime la croissance dépendante et indépendante de l'ancrage, entraîne un arrêt du cycle cellulaire et induit l'apoptose dans les lignées cellulaires de côlon et de mélanome hébergeant la mutation B-RafV600E. Le profil de réactivité croisée de AZ628 suggère que, de manière similaire, AZ628 pourrait être anti-angiogénique en se basant sur la prévention du VEGFR2. [1] Les clones résistants à AZ628 sont environ 100 fois plus résistants à AZ628 que la lignée cellulaire parentale, présentant une IC50 d'environ 10 μM, comparée à 0,1 μM pour la lignée cellulaire parentale. Une suppression efficace des niveaux de p-ERK1/2 est observée dans la lignée cellulaire parentale M14 après traitement avec des concentrations croissantes de AZ628. Les clones résistants à AZ628 expriment un niveau élevé de CRAF. L'expression élevée de CRAF est un mécanisme potentiel de résistance acquise à une exposition continue à AZ628, entraînant une activation soutenue de ERK1/2. L'activité de p-ERK1/2 n'est pas significativement inhibée par l'exposition à AZ628 dans l'une de ces trois lignées cellulaires insensibles à AZ628 (Wm1552C). Contrairement aux cellules M14 résistantes à AZ628 dans lesquelles AZ628 ne parvient pas à supprimer l'activation d'ERK, le traitement par AZ628 atténue efficacement l'activation d'ERK dans les cellules de mélanome mutantes NRAS.[2]

• Lignées cellulaires

  M14 expressing the V600E BRAF mutation

• Concentrations

  0.01-10 μM

• Temps dincubation

  Overnight

• Méthode

  Approximately 0.5-2.5 × 10⁵ M14 cells are seeded in 12 or 24 - well plates, respectively, in medium supplemented with 5% FBS. After overnight incubation, the cells are treated with various concentrations of AZ628. Fresh medium and drug is replaced every 2 days until the untreated control wells reached confluence. At this time-point, the media is removed and the cells are fixed in 4% formaldehyde in PBS for 20 minutes at room temperature. Cells are then washed twice with PBS and stained with a 1:5000 solution of the fluorescent nucleic acid stain Syto60. Quantitation of fluorescent signal intensity is carried out at 700 nm, using an Odyssey Infrared Imager. Each experiment is performed in quadruplicate and the results shown represent the average of the four values compared to untreated wells. Error bars represent standard deviation of the 4 values from the mean. High-throughput cell growth/viability assays are performed.