KD025 (Belumosudil)

Le Belumosudil (KD025) régule à la baisse la sécrétion d'IL-17 et d'IL-21 dans les PBMC humains, et entraîne une régulation à la baisse de la phosphorylation de STAT3, de l'expression d'IRF4 et de RORγt dans les lymphocytes T CD4+. [2]

Il inhibe également la sécrétion d'IL-21, d'IL-17 et d'IFNγ, tout en diminuant la STAT3 phosphorylée et en réduisant l'expression protéique d'IRF4 et de BCL6 dans les cellules mononucléaires du sang périphérique humain. [3]

Le Belumosudil (KD025) (200 mg/kg, p.o.) inhibe l'activité de ROCK dans le cerveau et le cœur, mesurée par le degré de phosphorylation de MYPT1. Il réduit significativement la zone de défaut de perfusion et de perte de tissu dans l'hémisphère ipsilatéral. [1]

Dans un modèle murin d'arthrite induite par le collagène (AIC), ce composé (200 mg/kg, i.p.) régule à la baisse la progression de l'arthrite induite par le collagène via le ciblage de la voie médiée par les Th17. [2]

Il (150 mg/kg, i.p. ou p.o.) améliore efficacement la GVHD chronique dans un modèle de décalage MHC complet de GVHD chronique multisystémique avec syndrome de bronchiolite oblitérante et un modèle de décalage MHC mineur de GVHD sclérodermique. [3]

• Essais ROCK1 et ROCK2 recombinants

  Les dilutions et les réactions du composé Belumosudil (KD025) sont effectuées dans des plaques à 96 puits en polystyrène à faible liaison. La filtration est réalisée dans des plaques filtrantes à 96 puits contenant des membranes échangeuses de cations phospho-cellulose hydrophiles. L'activité enzymatique des ROCK1 et ROCK2 recombinantes est mesurée radiométriquement dans 50 μL de mélange réactionnel contenant un tampon d'essai (50 mmol/L Tris, pH 7,5, 0,1 mmol/L d'acide éthylèneglycoltétraacétique, 10 mmol/L d'acétate de magnésium et 1 mmol/L de dithiothréitol). La réaction est incubée pendant 45 min à température ambiante et arrêtée avec 25 μL d'acide phosphorique à 3 %. Le peptide S6 long phosphorylé est séparé de l'ATP [[gamma]-³³P] non réagi par filtration du contenu de la réaction éteinte à travers une plaque filtrante de phosphocellulose P30. Chaque filtre est lavé trois fois avec 75 μL d'acide phosphorique à 75 mmol/L et une fois avec 30 μL de méthanol à 100 %. Les plaques filtrantes sont laissées sécher et 30 μL de liquide de scintillation OptiPhase 'SuperMix' sont ajoutés à chaque puits. Le ³³Phosphore est quantifié dans un compteur à scintillation I450 MicroBeta et corrigé en soustrayant la radioactivité associée aux échantillons de fond. Les données sont analysées et exprimées en pourcentage d'inhibition en utilisant la formule ((U - B)/(C - B)) × 100 où U est la valeur inconnue, B est la moyenne des puits de fond de staurosporine, et C est la moyenne des puits de contrôle. L'ajustement de la courbe est effectué par le logiciel GraphPad Prism en utilisant une analyse de type équation dose-réponse sigmoïdale (pente variable) pour générer les valeurs d'IC50. Les valeurs de Ki sont calculées à partir d'une équation de Ki = IC50/(1 + [S]/Km)), où [S] et Km sont la concentration d'ATP et la valeur Km de l'ATP, respectivement.

• Lignées cellulaires

  A7r5 cells

• Concentrations

  10 µM

• Temps dincubation

  2 h

• Méthode

  Cells were treated with Belumosudil (KD025) for 2 hours.

• Modèles animaux

  Young adult, aged, or type 2 diabetic mice

• Posologies

  300 mg/kg

• Administration

  p.o.