BPTES

BPTES inhibe l'activité de la glutaminase exprimée dans les cellules rénales humaines avec une IC50 de 0,18 μM, et inhibe l'efflux de glutamate par la microglie avec une IC50 de 80-120 nM. [1] Ce composé ralentit préférentiellement la croissance cellulaire dans les cellules D54 avec une IDH1 mutante. Il inhibe également l'activité de la glutaminase, abaisse les niveaux de glutamate et d'α-KG, et augmente les intermédiaires glycolytiques. [2] Ce produit chimique (10 μM) inhibe la croissance cellulaire des cellules mHCC 3–4 dérivées de tumeurs LAP/MYC. Il inhibe également la croissance des cellules P493 dépendantes de MYC en bloquant la réplication de l'ADN, conduisant à la mort cellulaire et à la fragmentation. [3]

Chez les souris LAP/MYC, BPTES (12,5 mg/kg, i.p.) prolonge la survie sans effets significatifs sur les niveaux de MYC, GLS ou GLS2. Ce composé (200 μg/souris, i.p.) inhibe également la croissance des cellules tumorales chez les souris porteuses de xénogreffes tumorales P493. [3]

• Inhibition de la Glutaminase : Essai sans cellules

  Les plaques d'essai sont préparées avec 2 μL de composé test dans du DMSO/puits. L'enzyme est diluée à 1 unité (foie) ou 0,8 unité (rein)/100 μL dans le tampon d'essai de la glutaminase, et 100 μL d'enzyme diluée sont ajoutés à chaque puits de la plaque d'essai à l'aide d'un Multidrop. Le contenu est mélangé en agitant à pleine vitesse pendant 1 minute sur un TiterMix 100. Les plaques sont préincubées à température ambiante (TA) pendant 20 minutes pour permettre la liaison des composés test à la glutaminase, et 50 μL de solution de glutamine (7 mM dans le tampon d'essai) sont ajoutés à chaque puits à l'aide d'un Multidrop. Le contenu est agité à pleine vitesse pendant 30 secondes sur un TiterMix 100, et les plaques sont ensuite incubées à TA pendant 60 minutes (foie) ou 90 minutes (rein). Pour arrêter les réactions, 20 μL de HCl (0,3 N) sont ajoutés à chaque puits à l'aide d'un Multidrop et mélangés immédiatement en agitant pendant 30 secondes sur un TiterMix 100. Pour la quantification, le glutamate (formé par hydrolyse de la glutamine catalysée par la glutaminase) est oxydé en 2-oxoglutarate par une deuxième enzyme, la glutamate déshydrogénase (GDH), avec la production concomitante de la forme réduite du nicotinamide adénine dinucléotide (NADH). La réduction du nitro blue tetrazolium (NBT) dans la solution d'essai par le NADH, catalysée par le phénazine méthosulfate (PMS), entraîne la formation d'un formazan bleu-violet. L'absorption du formazan à 540 nm est linéairement proportionnelle à la concentration de glutamate jusqu'à 200 μM. Le réactif NBT/GDH (50 μL) est ajouté à chaque puits à l'aide d'un Multidrop et mélangé en agitant pendant 30 secondes sur un TiterMix 100, et les plaques sont incubées à TA pendant 20 minutes pour permettre la formation de couleur par la réaction GDH. La concentration de glutamate est déterminée à partir de la concentration de formazan telle que déterminée par la lecture de la DO540 nm sur un SpectraMax 340.

• Lignées cellulaires

  D54 cells

• Concentrations

  --

• Temps dincubation

  48 h

• Méthode

  Cell growth assays are carried out using alamarBlue. Cells are plated at a density of 500 cells/well in a 96-well black clear bottom plate. At 24 hrs, media is changed to the appropriate media (DMEM with 4.5 g/L, 1.5 g/L or 0.1 g/L glucose, 10% FBS, pencillin/streptomycin, and 4 mM glutamine). 48 hours after plating, compounds or DMSO are added. Media and alamarBlue is added to a volume of 200 礚 in each well. Fluorescence is measured at 48 hrs (AOA, this compound) using a Victor3 plate-reader.

• Modèles animaux

  LAP/MYC mice

• Posologies

  12.5 mg/kg

• Administration

  i.p.