BX-912

N° de catalogueS1275 Lot :S127501

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Données techniques

Formule

C₂₀H₂₃BrN₈O

Poids moléculaire

471.35

Numéro CAS

702674-56-4

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

94 mg/mL (199.42 mM)

Ethanol

94 mg/mL (199.42 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	30.000mg/ml (63.65mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

BX912 est un inhibiteur puissant et spécifique de PDK1 avec une IC50 de 12 nM, une sélectivité 9 et 105 fois supérieure pour PDK1 que pour PKA et PKC dans les essais sans cellules, respectivement. Par rapport à GSK3 , la sélectivité pour PDK1 est 600 fois supérieure.

Cibles

PDK-1 (Cell-free assay)	PKA (Cell-free assay)	KDR (Cell-free assay)	CDK2/CyclinE (Cell-free assay)	Chk1 (Cell-free assay)	Voir plus
12 nM	110 nM	410 nM	650 nM	830 nM	Voir plus

In vitro

BX912 prévient ChcK1, PKA, c-kit et KDR avec une IC50 de 0,83, 0,11, 0,85 et 0,41 , respectivement. BX912 bloque la signalisation PDK1/Akt dans les cellules tumorales et supprime la croissance dépendante de l'ancrage d'une variété de lignées cellulaires tumorales (telles que les cellules PC-3) en culture ou induit l'apoptose. Un certain nombre de lignées cellulaires cancéreuses (telles que le cancer du sein MDA-468) avec une activité Akt élevée sont >30 fois plus sensibles à l'inhibition de la croissance par l'inhibiteur de PDK1 BX912 dans l'agar mou que sur du plastique de culture tissulaire, ce qui est cohérent avec la fonction de survie cellulaire de la voie de signalisation PDK1/Akt, particulièrement importante pour les cellules non attachées. BX912 bloque puissamment l'activité enzymatique de PDK1 dans un format d'essai kinase direct, bien que BX912 ne parvienne pas à bloquer l'activité AKT2 préactivée (IC50 > 10 ). Par conséquent, BX-912 est un inhibiteur direct de PDK1. BX912 est un inhibiteur compétitif de l'activité de PDK1 par rapport à son substrat, l'ATP, suggérant que BX912 se lie à la poche de liaison de l'ATP de PDK1. Le squelette aminopyrimidine de BX912 adopte une orientation similaire dans le site actif de PDK1. BX912 favorise une augmentation prononcée de la population de cellules MDA-468 avec un contenu en ADN de 4 N, indicatif d'un blocage en phase G2/M du cycle cellulaire. BX912 inhibe également puissamment la croissance des cellules HCT-116 dans l'agar mou, montrant un effet inhibiteur de 96 % à une dose de 1 . BX912 inhibe puissamment la croissance des cellules PC-3 dans l'agar mou, affichant une IC50 de 0,32 .

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Essais de kinase PDK1 est analysé dans un essai kinase direct et un format d'essai couplé mesurant l'activation d'AKT2 médiée par PDK1 et PtdIns-3,4-P2. Pour l'essai couplé, le mélange réactionnel final (60 L) contenait : 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL d'albumine de sérum bovin, 18 mM -glycérol phosphate, 0,7 mM dithiothréitol, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de substrat peptidique biotinylé (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 L de vésicules phospholipidiques contenant du PtdIns-3,4-P2, 60 pg de PDK1 humain recombinant purifié et 172 ng d'AKT2 humain recombinant purifié. Après incubation pendant 2 heures à température ambiante, le peptide marqué à la biotine est capturé à partir de 10 L du mélange réactionnel sur des billes SPA revêtues de streptavidine, et la formation du produit est mesurée par proximité de scintillation dans un compteur Wallac MicroBeta. Le produit formé est proportionnel au temps d'incubation et à la quantité de PDK1 et d'AKT2 inactive ajoutée. PDK1 est ajouté à des niveaux sous-optimaux afin que l'essai puisse détecter avec sensibilité les inhibiteurs de l'activation d'AKT2 ainsi que l'inhibiteur direct BX912 de PDK1 ou d'AKT2. Pour mesurer directement l'activité de PDK1, le mélange réactionnel final (60 L) contenait 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1 % -mercaptoéthanol, 1 mg/mL d'albumine de sérum bovin, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de substrat peptidique (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) et 60 ng de PDK1 humain recombinant purifié. Après 4 heures à température ambiante, 25 mM EDTA sont ajoutés et une partie du mélange réactionnel est déposée sur du papier phosphocellulose P81. Le papier filtre est lavé trois fois avec 0,75 % d'acide phosphorique et une fois avec de l'acétone. Après séchage, le peptide marqué lié au filtre est quantifié à l'aide d'un phosphorimageur.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires MDA-468, MDA-453 Concentrations 0.001-1 μM Temps dincubation 72 hours Méthode Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Test kinase :^{^[1]}

Essais de kinase
PDK1 est analysé dans un essai kinase direct et un format d'essai couplé mesurant l'activation d'AKT2 médiée par PDK1 et PtdIns-3,4-P2. Pour l'essai couplé, le mélange réactionnel final (60 L) contenait : 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL d'albumine de sérum bovin, 18 mM -glycérol phosphate, 0,7 mM dithiothréitol, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de substrat peptidique biotinylé (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 L de vésicules phospholipidiques contenant du PtdIns-3,4-P2, 60 pg de PDK1 humain recombinant purifié et 172 ng d'AKT2 humain recombinant purifié. Après incubation pendant 2 heures à température ambiante, le peptide marqué à la biotine est capturé à partir de 10 L du mélange réactionnel sur des billes SPA revêtues de streptavidine, et la formation du produit est mesurée par proximité de scintillation dans un compteur Wallac MicroBeta. Le produit formé est proportionnel au temps d'incubation et à la quantité de PDK1 et d'AKT2 inactive ajoutée. PDK1 est ajouté à des niveaux sous-optimaux afin que l'essai puisse détecter avec sensibilité les inhibiteurs de l'activation d'AKT2 ainsi que l'inhibiteur direct BX912 de PDK1 ou d'AKT2. Pour mesurer directement l'activité de PDK1, le mélange réactionnel final (60 L) contenait 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1 % -mercaptoéthanol, 1 mg/mL d'albumine de sérum bovin, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0,2 Ci de [- ³³P]ATP, 7,5 M de substrat peptidique (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) et 60 ng de PDK1 humain recombinant purifié. Après 4 heures à température ambiante, 25 mM EDTA sont ajoutés et une partie du mélange réactionnel est déposée sur du papier phosphocellulose P81. Le papier filtre est lavé trois fois avec 0,75 % d'acide phosphorique et une fois avec de l'acétone. Après séchage, le peptide marqué lié au filtre est quantifié à l'aide d'un phosphorimageur.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
MDA-468, MDA-453
Concentrations
0.001-1 μM
Temps dincubation
72 hours
Méthode
Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15772071/

Validation du produit par le client

: , , Oncotarget, 2014, 5(21):10732-44.

: Données de [ , , Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305 ]

Sellecks BX-912 A été cité par 14 Publications

Deregulation and epigenetic modification of BCL2-family genes cause resistance to venetoclax in hematologic malignancies [ Blood, 2022, blood.2021014304]	PubMed: 35704690
The 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 is an essential upstream activator of protein kinase A in malaria parasites [ PLoS Biol, 2021, 19(12):e3001483]	PubMed: 34879056
Effects of inhibiting PDK‑1 expression in bone marrow mesenchymal stem cells on osteoblast differentiation in vitro [ Mol Med Rep, 2021, 23(2)118]	PubMed: 33300048
Application of a Biphasic Mathematical Model of Cancer Cell Drug Response for Formulating Potent and Synergistic Targeted Drug Combinations to Triple Negative Breast Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 27;12(5)pii: E1087]	PubMed: 32349331
Biphasic Mathematical Model of Cell-Drug Interaction That Separates Target-Specific and Off-Target Inhibition and Suggests Potent Targeted Drug Combinations for Multi-Driver Colorectal Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 13;12(2) pii: E436]	PubMed: 32069833
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790]	PubMed: 31160710
Discoidin Domain Receptor 2 Signaling Regulates Fibroblast Apoptosis through PDK1/Akt [Jia S Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305]	PubMed: 29652518
Systematic Functional Characterization of Resistance to PI3K Inhibition in Breast Cancer. [ Cancer Discov, 2016, 6(10):1134-1147]	PubMed: 27604488

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