Delanzomib

Le CEP-18770 démontre une prévention marginale des activités trypsiques et peptidyl-glutamyl du Proteasome.[1] Le CEP-18770 inhibe les cellules cancéreuses ovariennes A2780, le cancer de la prostate PC3, le H460, le cancer du côlon LoVo, le myélome multiple RPMI8226 et le lymphome non hodgkinien anaplasique HS-Sultan avec des valeurs de CI50 de 13,7, 22,2, 34,2, 11,3, 5,6 et 8,2 nM, respectivement.[1] Le CEP-18770 bloque la voie ubiquitine-Proteasome dans plusieurs MM et dans la lignée cellulaire de leucémie myéloïde chronique, K562. Le CEP-18770 provoque une accumulation de protéines ubiquitinées sur 4 à 8 heures.[1] La dégradation de l'IκBα est complètement bloquée par un prétraitement au CEP-18770. Le CEP-18770 inhibe significativement les niveaux élevés d'activité NF-κB dans les cellules RPMI-8226 et U266. La suppression dépendante du temps et de la concentration de l'activité de liaison à l'ADN du NF-kB dans les lignées cellulaires de MM par le CEP-18770 entraîne une diminution de l'expression de plusieurs gènes modulés par le NF-κB médiant la croissance et la survie des cellules tumorales, y compris l'IkBα lui-même, la protéine inhibitrice de l'apoptose liée au chromosome X (XIAP), les cytokines pro-inflammatoires TNF-α et l'interleukine-1β (IL-1β), la molécule d'adhésion intracellulaire (ICAM1) et le facteur pro-angiogénique facteur de croissance endothélial vasculaire.[1] L'expression de ces gènes médiés par le NF-κB est associée à une meilleure réponse clinique à cet agent, soulignant leur valeur pronostique potentielle en réponse à l'exposition au CEP-18770.[1] L'activité pro-apoptotique du CEP-18770 contre le MM n'est pas limitée uniquement aux lignées cellulaires de MM dérivées de tumeurs, mais s'étend aux explants primaires de MM de patients en rechute ou réfractaires.[1] De plus, le CEP-18770 en combinaison produit une inhibition synergique de la viabilité des cellules de MM in vitro.[2]

Le CEP-18770 révèle une inhibition relative du poids tumoral dose-dépendante et soutenue. Le CEP-18770 conduit à des régressions tumorales complètes dose-dépendantes, ce qui entraîne une incidence de 50 % de CR à sa dose maximale tolérée (DMT) de 1,2 mg/kg par voie intraveineuse.[1] Le CEP-18770 révèle une augmentation dose-dépendante de l'incidence de souris sans tumeur à la fin de ces études (120 jours après la transplantation tumorale). L'administration orale de CEP-18770 produit une diminution marquée du poids tumoral et une incidence dose-dépendante notable de régression tumorale complète avec des changements minimaux du poids corporel des animaux au cours des études de 120 jours.[1]_ELes doses équiactives de CEP-18770 révèlent une inhibition plus importante et plus soutenue de l'activité du Proteasome tumoral, correspondant temporairement à l'induction maximale de l'activité des caspases-3 et 7.[1] Le signal apoptotique maximal est 2,5 fois plus élevé pour le CEP-18770. En revanche, les profils d'inhibition du Proteasome du CEP-18870 sont comparables dans les tissus périphériques normaux de souris examinés (foie, poumons, sang total et cerveau [aucune activité]) tant par leur magnitude que par leur durée.[1] Aucune inhibition du Proteasome n'est détectée dans le tissu cérébral à aucun moment pour le CEP-18770 ou.[1] Le CEP-18770 PO en monothérapie montre également des effets anti-MM marqués dans ces modèles de xénogreffe.[1]

• Sondage de l'activité du Proteasome dans les extraits cellulaires

  Les cellules humaines de myélome multiple sont lavées deux fois avec du sérum physiologique tamponné au phosphate froid, centrifugées et lysées avec un volume de billes de verre (<106 microns, lavées à l'acide) et un volume égal de tampon d'homogénéisation (50 mM Tris (pH 7,4), 1 mM dithiothréitol, 5 mM MgCl₂, 2 mM ATP et 250 mM saccharose) par vortexage à haute vitesse pendant 15 à 30 min à 4 °C. Les billes, les fractions membranaires, les noyaux et les débris cellulaires sont ensuite retirés du surnageant par centrifugation à 16 000 g pendant 5 min. La teneur en protéines des extraits est quantifiée à l'aide de l'essai de Bradford. L'activité du Proteasome est mesurée comme décrit ci-dessous. Des quantités égales (typiquement 60 g) de protéines sont dénaturées par ébullition dans un tampon d'échantillon réducteur, séparées par SDS-PAGE à 12,5 % et transférées électriquement sur des membranes de difluorure de polyvinylidène (PVDF). L'immunoblotting est effectué à l'aide d'un anticorps polyclonal dansyl-sulfonamidohexanoyl (1:7 500, lapin) et d'un anticorps secondaire de chèvre ou de porc anti-lapin couplé à la peroxydase de raifort, suivi d'une chimioluminescence améliorée.

• Lignées cellulaires

  HMEC and TEC cells

• Concentrations

  0-100 nM

• Temps dincubation

  6 hours

• Méthode

  HMEC and TEC cells are seeded into 24-well plates at a density of 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed, air dried, and stained with crystal violet as described. Cell number is determined, in duplicate samples, on the basis of a standard curve obtained with known cell numbers. All experiments are performed in triplicate. In vitro formation of capillary-like structures is studied on cells (4 × 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed (cells/well in 24-well plates) and seeded onto Matrigel-coated wells in DMEM containing 0.25% BSA. HMEC and TEC cells (5 × 10³ per well), suspended in 200 μL DMEM with 5% FCS (positive control), serum-free medium (negative control), are layered onto the Matrigel surface in the presence or absence of proteasome inhibitor CEP-18770. Cells are observed with a microscope and experimental results are then recorded after a 6-hour incubation at 37 °C. Data is analyzed, as the mean (× 1 SD) of total length of capillary-like structures, by the Micro-Image system and is expressed as mm/field by the computer analysis system in 5 different fields at 100 × magnification in duplicated wells for 4 different experiments.

• Modèles animaux

  Human MM RPMI 8226 subcutaneous xenograft model in SCID mice

• Posologies

  From 1.5 to 4 mg/kg, twice for 7 days to 4 weeks.

• Administration

  Intravenously