CFSE

Préparation de la solution de travail de CFDA-SE
1.1 Préparation de la solution mère
Dissoudre 1 mg de CFDA-SE dans 0,1794 mL de DMSO pour obtenir 10 mM de CFSE.
Remarque : Il est recommandé de conserver la solution mère à -20 ℃ ou -80 ℃ à l'abri de la lumière et d'éviter les cycles répétés de congélation-décongélation.
1.2 Préparation de cette solution de travail chimique
Diluer la solution mère dans un milieu de culture cellulaire sans sérum ou du PBS pour obtenir 5-10 μM de cette solution de travail chimique.
Remarque : Veuillez ajuster la concentration de cette solution de travail chimique en fonction de la situation réelle.
Coloration cellulaire
2.1 Pour les cellules en suspension : Centrifuger à 1000 g à 4℃ pendant 3-5 minutes, puis jeter le surnageant. Laver deux fois avec du PBS, 5 minutes à chaque fois.
Pour les cellules adhérentes : Jeter le milieu de culture cellulaire et ajouter de la trypsine pour dissocier les cellules afin d'obtenir une suspension unicellulaire. Centrifuger à 1000 g à 4℃ pendant 3-5 minutes, puis jeter le surnageant. Laver deux fois avec du PBS, 5 minutes à chaque fois.
2.2 Ajouter 1 mL de cette solution de travail chimique, puis incuber à température ambiante pendant 30 minutes.
2.3 Centrifuger à 400 g à 4℃ pendant 3-4 minutes, puis jeter le surnageant.
2.4 Laver deux fois avec du PBS, 5 minutes à chaque fois.
2.5 Remettre les cellules en suspension avec un milieu de culture cellulaire sans sérum ou du PBS, puis détecter par microscope à fluorescence ou cytomètre de flux.

Le marquage in vivo des cellules avec CFSE est réalisable sans pratiquement aucun effet toxique sur les cellules marquées ou adjacentes. Il présente des avantages pour les études de migration relativement à long terme, comme le montre la récupération des lymphocytes T dans les organes lymphoïdes périphériques[2].

• Lignées cellulaires

  human erythroleukaemic cell line K562, mouse lymphoma cell line YAC-1, human mammary cancer cell line MCF-7 and human melanoma cell line A375

• Concentrations

  2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM

• Temps dincubation

  5, 6, 7, 8, 10 and 15 min

• Méthode

  The 5 mM CFDA-SE stock in DMSO is diluted to different concentrations(2 µM, 3 µM, 4 µM, 5 µM, 10 µM and 20 µM) in PBS with a total volume of 1 ml. After each cell line is harvested and washed three times with PBS, 1×10⁹ cells are added to equal volume of this compound with different concentrations and incubated at 37°C for 5, 6, 7, 8, 10 and 15 min with agitation. The labeling reaction is stopped for 1 min by adding an equal volume of heat inactivated fetal bovine serum. The CFDA-SE labeled cells are washed twice with PBS and recounted, and the cell concentration is adjusted to 6×104cells/ml in IMDM containing 10% FCS.

• Modèles animaux

  C57Bl/6 mice

• Posologies

  10 μM

• Administration

  injected into thymic lobe