CP-673451

CP 673451 est un inhibiteur sélectif de PDGFRα/β avec une IC50 de 10 nM/1 nM, il présente une sélectivité >450 fois supérieure aux autres récepteurs angiogéniques. Dans les tumeurs de glioblastome, ce composé (33 mg/kg) fournit >50% d'inhibition du récepteur PDGFR-β pendant 4 heures, correspondant à une EC50 de 120 ng/mL dans le plasma au C_max. Dans un modèle d'angiogenèse par éponge, cet inhibiteur inhibe 70% de l'angiogenèse stimulée par PDGF-BB à une dose de 3 mg/kg (q.d. ×5, p.o., correspondant à 5,5 ng/mL au C_max).[1] Ce produit chimique diminue le taux de prolifération cellulaire par des mécanismes impliquant une phosphorylation réduite de GSK-3α et GSK-3β. Dans les cultures RD et RUCH2, il altère la capacité de formation de rhabdosphères et la différenciation cellulaire, et provoque une sénescence accrue. [2]

CP 673451 (administration orale quotidienne ?0 jours de manière routinière) inhibe la croissance tumorale (ED50 < 33 mg/kg) dans un certain nombre de xénogreffes tumorales humaines cultivées s.c. chez des souris athymiques, y compris le carcinome pulmonaire humain H460, les carcinomes du côlon humain Colo205 et LS174T, et le glioblastome multiforme humain U87MG. [1] Chez les souris porteuses de xénogreffes RUCH2, ce composé réduit la croissance tumorale et l'infiltration des cellules stromales. [2]

• Essai d'inhibition de Kinase

  Une construction de domaine kinase marquée par la glutathion S-transférase de la portion intracellulaire du PDGFR-β (acides aminés 693-1401, numéro d'accès J03278) est exprimée dans des cellules Sf-9 (système d'expression par baculovirus). La cinétique enzymatique est déterminée en incubant l'enzyme avec des concentrations croissantes d'ATP dans un tampon de phosphorylation [50 mmol/L HEPES (pH 7,3), 125 mmol/L NaCl, 24 mmol/L MgCl₂ dans des plaques de 96 puits Nunc Immuno MaxiSorp précédemment revêtues de 100 μL de 100 μg/mL de poly-Glu-Tyr (ratio 4:1) dilué dans du PBS. Après 10 minutes, les plaques sont lavées (PBS, 0,1% Tween 20), incubées avec un anticorps anti-phosphotyrosine-peroxydase de raifort, et diluées dans du PBS, 0,05% Tween 20, 3% BSA pendant 30 minutes à température ambiante. Les plaques sont lavées comme ci-dessus et incubées avec 3,3

• Lignées cellulaires

  PAE

• Concentrations

  ~3000 nM

• Temps dincubation

  18 min

• Méthode

  PAE cells stably expressing full-length PDGFR and VEGFR have been generated. For cell-based selectivity assays, PAE cells are transfected with fulllength human PDGFR-a, PDGFR-h, or VEGFR-2. Cells are seeded at 4×10⁵ cells/mL in 50 μL growth medium (Ham's F-12 media supplemented with 10% fetal bovine serum, 50,000 units each penicillin and streptomycin. After 6 to 8 hours, the growth medium is replaced with 50 μL serum-depleted medium (as above, but with 0.1% fetal bovine serum) and cells are incubated overnight. Immediately before compound addition, the medium was replaced with 95 μL serum-depleted medium. Compounds are diluted in 100% DMSO, added to the cells at a final DMSO concentration of 0.25% v/v, and incubated at 37°C for 10 minutes. Cells are stimulated with the appropriate ligand and incubated as above for an additional 8 minutes. The medium is removed and the cells washed once with PBS, then lysed with 50 μL HNTG buffer [20 mmol/L HEPES (pH 7.5), 150 mmol/L NaCl, 2% Triton X-100, 10% glycerol, 5 μmol/L EDTA, 2 mmol/L NaVO₄, and 1 EDTA-free complete protease inhibitor tablet per 25 mL] for 5 minutes at room temperature. Lysates are then diluted with 50 μL HG buffer [20 mmol/L HEPES (pH 7.5), 10% glycerol]. The diluted cell lysates are mixed thoroughly, 50 μL of supernatant are transferred to the ELISA capture plate, and incubated at room temperature for 2 hours with agitation. ELISA capture plates are prepared by coating 96-well ReactiBind goat-antirabbit plates with 100 μL/well of 5 μg/mL rabbit anti-human PDGFR-h, anti-PDGFR-a, or anti-VEGFR-2 antibody for 60 to 90 minutes. At the end of the 2-hour incubation the plates are washed (PBS, 0.1% Tween 20) before incubation with anti-phosphotyrosine-horseradish peroxidase antibody (diluted in PBS, 0.05% Tween 20) for 30 minutes at room temperature. The plates are washed again, then incubated with tetramethylbenzidine and evaluated as described above. IC50 values are calculated as percent inhibition of control.

• Modèles animaux

  Athymic female mice

• Posologies

  3, 10, or 33 mg/kg

• Administration

  Oral gavage