CPI-613 (Devimistat)

Le Devimistat (CPI-613) produit une toxicité sélective in vitro contre plusieurs lignées cellulaires tumorales, y compris les cellules de cancer du poumon humain H460 et les cellules de sarcome humain Saos-2, avec des valeurs de CE50 de 120 μM et 120 μM, respectivement. Il perturbe le métabolisme mitochondrial des cellules cancéreuses H460, y compris l'inhibition de l'activité du complexe PDH et la perte du potentiel de membrane mitochondriale de manière dépendante du temps et de la dose du médicament. De plus, ce composé (240 μM) induit également la mort cellulaire apoptotique et non apoptotique dans les cellules de cancer du poumon humain H460 et les cellules de sarcome humain Saos-2. [1]

Le Devimistat (CPI-613) présente une puissante activité anticancéreuse dans un modèle de xénogreffe tumorale humaine d'une cellule tumorale pancréatique (BxPC-3) à 25 mg/kg. De même, ce composé (10 mg/kg) produit également une inhibition significative de la croissance tumorale du carcinome pulmonaire non à petites cellules humain H460 dans un modèle murin. En outre, il produit peu ou pas de toxicité d'effets secondaires dans les plages de doses thérapeutiques attendues chez les modèles animaux de grande taille et a une dose maximale tolérée de 100 mg/kg chez les souris. [1]

• Phosphorylation de l'E1α

  Les cellules sont ensemencées et cultivées pendant la nuit. Cinq boîtes par groupe de test sont traitées avec du Devimistat (CPI-613) ou un solvant. Les cellules sont lysées in situ avec 150 μL de tampon de lyse A [455 μL de solubilisateur de protéines Zoom 2D 1, 2,5 μL de Tris base 1M, 5 μL de cocktail d'inhibiteurs de protéase 100X ; 5 μL de DTT 2M] et les lysats des cinq boîtes sont regroupés dans un tube à microfuge de 1,5 mL et soniqués sur glace pendant 15 passages à 50% de puissance. Après une incubation de 10 minutes à température ambiante, 2,5 μL de diméthylacrylamide (DMA) sont ajoutés et les lysats sont incubés pendant 10 minutes supplémentaires. 5 μL de DTT 2M sont ajoutés pour neutraliser l'excès de DMA. Les lysats sont centrifugés pendant 15 minutes et le surnageant est récupéré. Ensuite, 40 μL de lysat sont mélangés avec 0,8 μL d'ampholytes pH 3-10, 0,75 μL de DTT 2M et complétés à 150 μL avec du solubilisateur de protéines Zoom 2D 1. 150 μL d'échantillon sont chargés dans l'IPG runner, et des bandes IPG pH 3-10NL sont ajoutées. Les bandes sont trempées pendant la nuit à température ambiante. Un protocole par étapes est utilisé pour la focalisation isoélectrique (250V, 20min. ; 450V 15min ; 750V 15min 2000V 30 minutes). Pour la deuxième dimension, les bandes sont traitées pendant 15 minutes dans un tampon de charge 1X, suivi de 15 minutes dans un tampon de charge 1X plus 160 mM d'acide iodoacétique. Les bandes sont électrophorées sur des gels NuPAGE 4-12% Bis Tris ZOOM. Les protéines sont transférées sur des membranes PVDF de 4,5 μm. Les sérines 232, 293 et 300 sont les cibles des trois événements de phosphorylation PDK bien caractérisés contrôlant l'activité E1. Des quantités égales de protéines provenant de cellules traitées et traitées fictivement sont chargées sur des gels et les transferts Western sont sondés avec un anticorps anti-E1α comme contrôle de correspondance interne ou l'un des trois anticorps anti-phospho-E1α.

• Lignées cellulaires

  HN6 cells

• Concentrations

  100 μM

• Temps dincubation

  24 h

• Méthode

  Cells were treated with or without 100 μM Devimistat (CPI-613) for 24 h.

• Modèles animaux

  BxPC-3 and H460 cells are injected s.c. into the dorsal flank of CD1 nu/nu mice.

• Posologies

  ≤25 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p.