D 4476

N° de catalogueS7642 Lot :S764202

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Données techniques

Formule

C₂₃H₁₈N₄O₃

Poids moléculaire

398.41

Numéro CAS

301836-43-1

Solubilité (25°C)*

In vitro

DMSO

79 mg/mL (198.28 mM)

Ethanol

79 mg/mL (198.28 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 Corn oil Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.	3.950mg/ml (9.91mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 79 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

D 4476 est un inhibiteur puissant, sélectif et perméant aux cellules de CK1 (casein kinase 1) avec une IC50 de 200 nM et 300 nM dans un essai sans cellules pour CK1 de Schizosaccharomyces pombe et CK1δ, respectivement. Agit également comme un inhibiteur de ALK5 avec une IC50 de 500 nM.

Cibles

CK1 from Schizosaccharomyces pombe	CK1δ	ALK5
200 nM	300 nM	500 nM

In vitro

Le D4476 (10 μM) inhibe efficacement CK1 et ALK5 avec des activités d'environ 7 % et 22 % par rapport au groupe témoin, respectivement. Dans les cellules d'hépatome H4IIE, le D4476 inhibe spécifiquement la phosphorylation du facteur de transcription endogène de la boîte à fourchette O1a (FOXO1a) sur Ser322 et Ser325, sans affecter la phosphorylation d'autres sites. Le D4476 induit une cytotoxicité dans les lignées ANBL6, INA6 et RPMI8226; les lignées MM1S et U266 sont moins sensibles; et la lignée OPM1 est totalement résistante. Des concentrations élevées (50 μM) de D4476 ont induit une toxicité dans toutes les lignées de myélome multiple (MM). Dans les cellules MM, le D4476 augmente les niveaux de protéines de TP53, P27 et FADD, ainsi que la progression du cycle cellulaire et l'induction de l'apoptose. Le traitement des cellules souches leucémiques (CSL) avec le D4476 montre une destruction hautement sélective des CSL par rapport aux CSPH normales.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[4]}	CK1 kinase assay Tous les essais de protéine kinase (25 μL) sont réalisés à température ambiante (21℃). Les essais sont effectués pendant 40 min à l'aide d'un poste de travail d'automatisation de laboratoire Biomek 2000 au format 96 puits. Les concentrations d'acétate de magnésium et de [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) dans les essais sont de 10 mM et 0,1 mM, respectivement. Les essais sont initiés avec du MgATP et arrêtés par l'ajout de 5 μL d'acide orthophosphorique à 0,5 M. Des aliquotes sont ensuite déposées sur des tapis filtrants P30, lavées quatre fois dans de l'acide phosphorique à 75 mM pour éliminer l'ATP, une fois dans du méthanol, puis séchées et comptées pour la radioactivité. CK1 δ (5-20 m-unités), dilué dans 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1 % (v/v) Triton X-100, 5 mM dithiothréitol, 50 % (v/v) glycérol, est dosé contre le peptide RRKDLHDDEEDEAMSITA dans une incubation contenant 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1 % (v/v) Triton X-100 et 0,5 mM de peptide substrat.
Test cellulaire :^{^[2]}	Lignées cellulaires MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells Concentrations 50 μM Temps dincubation 72 h Méthode MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Test kinase :^{^[4]}

CK1 kinase assay
Tous les essais de protéine kinase (25 μL) sont réalisés à température ambiante (21℃). Les essais sont effectués pendant 40 min à l'aide d'un poste de travail d'automatisation de laboratoire Biomek 2000 au format 96 puits. Les concentrations d'acétate de magnésium et de [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) dans les essais sont de 10 mM et 0,1 mM, respectivement. Les essais sont initiés avec du MgATP et arrêtés par l'ajout de 5 μL d'acide orthophosphorique à 0,5 M. Des aliquotes sont ensuite déposées sur des tapis filtrants P30, lavées quatre fois dans de l'acide phosphorique à 75 mM pour éliminer l'ATP, une fois dans du méthanol, puis séchées et comptées pour la radioactivité. CK1 δ (5-20 m-unités), dilué dans 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1 % (v/v) Triton X-100, 5 mM dithiothréitol, 50 % (v/v) glycérol, est dosé contre le peptide RRKDLHDDEEDEAMSITA dans une incubation contenant 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1 % (v/v) Triton X-100 et 0,5 mM de peptide substrat.

Test cellulaire :^{^[2]}

Lignées cellulaires
MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells
Concentrations
50 μM
Temps dincubation
72 h
Méthode
MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14710188/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24962017/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24616378/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12534346/

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Validation du produit par le client

: Données de [ , , Mol Oncol, 2016, 10(5):677-92 ]

Sellecks D 4476 A été cité par 22 Publications

SCFβ-TrCP targets Ajuba for degradation in a GSK3β-dependent manner in colorectal cancer [ Neoplasia, 2025, 66:101175]	PubMed: 40367710
A kinome-wide CRISPR screen identifies CK1α as a target to overcome enzalutamide resistance of prostate cancer [ Cell Rep Med, 2023, 4(4):101015]	PubMed: 37075701
Golgi retention and oncogenic KIT signaling via PLCγ2-PKD2-PI4KIIIβ activation in gastrointestinal stromal tumor cells [ Cell Rep, 2023, 42(9):113035]	PubMed: 37616163
Neddylation inhibition induces glutamine uptake and metabolism by targeting CRL3SPOP E3 ligase in cancer cells [ Nat Commun, 2022, 13(1):3034]	PubMed: 35641493
CHMP2B regulates TDP-43 phosphorylation and cytotoxicity independent of autophagy via CK1 [ J Cell Biol, 2022, 221(1)e202103033]	PubMed: 34726688
CK1α upregulates the IFNAR1 expression to prompt the anti-HBV effect of type I IFN in hepatoma carcinoma cells [ Virol Sin, 2022, S1995-820X(22)00143-2]	PubMed: 35985475
SPOP and OTUD7A Control EWS-FLI1 Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ Adv Sci (Weinh), 2021, e2004846]	PubMed: 34060252
SPOPandOTUD7AControlEWS–FLI1Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ ADVANCED SCIENCE, 2021, 8(14)]	PubMed: None
CK1δ stimulates ubiquitination-dependent proteasomal degradation of ATF4 to promote chemoresistance in gastric Cancer [ Clin Transl Med, 2021, 11(10):e587]	PubMed: 34709767
SKI activates the Hippo pathway via LIMD1 to inhibit cardiac fibroblast activation [ Basic Res Cardiol, 2021, 116(1):25]	PubMed: 33847835

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