D-Luciferin

1.Protocole exemple pour les essais d'imagerie bioluminescente in vitro
a) Préparer une solution mère de Luciferin à 100 mM (100-200X) dans de l'eau stérile. Bien mélanger. Utiliser immédiatement, ou faire des aliquots à usage unique, et conserver à -20℃, éviter les cycles de congélation-décongélation, éviter l'exposition à la lumière.
b) Préparer une solution de travail de D-Luciferin à 0,5-1 mM dans un milieu de culture tissulaire préchauffé.
c) Aspirer le milieu des cellules cultivées.
d) Ajouter cette solution de travail composée aux cellules et incuber les cellules pendant 5-10 minutes à 37℃ juste avant l'imagerie.
2.Protocole exemple pour les essais d'imagerie bioluminescente in vivo
a) Préparer une solution mère de Luciferin à 15 mg/mL dans du DPBS, sans Mg2+ et Ca2+. Bien mélanger.
b) Stériliser la solution par filtration à travers un filtre de 0,2 µm. Utiliser immédiatement, ou faire des aliquots à usage unique, et conserver à -20℃, éviter les cycles de congélation-décongélation, éviter l'exposition à la lumière.
c) Injecter la luciférine par voie intra-péritonéale (i.p.) 10-15 minutes avant l'imagerie à raison de 150 mg/kg (ou 10 µL/g de cette solution mère chimique) du poids corporel de l'animal.
Remarque: Une étude cinétique de la luciférine doit être réalisée pour chaque modèle animal afin de déterminer le temps de signal maximal.
3.Protocole exemple pour les essais de rapporteur de luciférine
a) Préparer une solution mère de Luciferin à 100 mM dans de l'eau stérile. Utiliser immédiatement, ou faire des aliquots à usage unique, et conserver à -20℃, éviter les cycles de congélation-décongélation, éviter l'exposition à la lumière.
b) Préparer une solution de travail de ce composé à 1 mM avec 3 mM d'ATP, 1 mM de DTT et 15 mM de MgSO4 dans un tampon tricine 25 mM pH 7,8.
c) Pipeter 5-10 µL de lysat cellulaire dans une microplaque. Utiliser un réactif de lyse ou un tampon sans lysat comme blanc.
d) Amorcer le luminomètre avec cette solution de travail chimique.
e) Injecter 200 µL de cette solution de travail composée sans délai et avec un temps d'intégration de 10 secondes.

Dans un modèle murin immunocompétent de cancer de l'ovaire, l'utilisation du substrat D-Luciferin et de la luciférase de luciole préserve les interactions immunitaires hôte-tumeur, car l'imagerie bioluminescente est une indication plus sensible de la croissance tumorale que la prise de poids. [2]

• Modèles animaux

  Female BALB/c nu/nu mice

• Posologies

  75 mg/kg

• Administration

  s.c.