DAPT

Des cellules rénales embryonnaires humaines (American Type Culture Collection CRL-1573), transfectées avec le gène de l'APP751 (HEK 293) sont utilisées pour les tests de réduction d'Aβ de routine. Les cellules sont ensemencées dans des plaques à 96 puits et laissées adhérer pendant la nuit dans du milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) supplémenté avec 10 % de sérum bovin fœtal inactivé par la chaleur. DAPT est dilué à partir de solutions mères dans du diméthylsulfoxyde (DMSO) pour obtenir une concentration finale égale à 0,1 % de DMSO dans le milieu. Les cellules sont prétraitées pendant 2 heures à 37 °C avec ce composé, les milieux sont aspirés et de nouvelles solutions de composé sont appliquées. Après une période de traitement supplémentaire de 2 heures, le milieu conditionné est prélevé et analysé par un ELISA sandwich (266–3D6) spécifique de l'Aβ total. La réduction de la production d'Aβ est mesurée par rapport aux cellules témoins traitées avec 0,1 % de DMSO et exprimée en pourcentage d'inhibition. Les données d'au moins six doses en double sont ajustées à un modèle logistique à quatre paramètres à l'aide du logiciel XLfit afin de déterminer la puissance. Les cultures neuronales humaines et de souris PDAPP sont cultivées dans un milieu sans sérum pour améliorer leurs caractéristiques neuronales, et sont apparues comme étant supérieures à 90 % de neurones après maturation avant utilisation. Les milieux conditionnés pour établir les valeurs de base d'Aβ sont collectés en ajoutant du milieu frais à chaque puits et incubés pendant 24 heures à 37 °C en l'absence de ce produit chimique. Les cultures sont ensuite traitées avec du milieu frais contenant ce composé à la gamme de concentrations souhaitée pendant 24 heures supplémentaires à 37 °C, et les milieux conditionnés sont collectés. Pour la mesure de l'Aβ total, les échantillons sont analysés avec le même ELISA (266–3D6) que celui utilisé pour les tests sur les cellules HEK 293. Les analyses des échantillons pour la production d'Aβ42 sont effectuées par un ELISA séparé (21F12–3D6) qui utilise un anticorps de capture spécifique de l'extrémité C-terminale de l'Aβ42. L'inhibition de la production de l'Aβ total et de l'Aβ42 est déterminée par la différence entre les valeurs du traitement du composé et les périodes de base. Après avoir tracé le pourcentage d'inhibition en fonction de la concentration de ce composé, les données sont analysées avec le logiciel XLfit, comme ci-dessus, pour déterminer la puissance.

SK-MES-1

2.5 μM to 160 μM

72 hours

Cells are seeded into 96-well plates and exposed to 0.1% DMSO or DAPT at concentrations in the range of 2.5 μM–160 μM for 72 hours. Cytotoxicity is determined with 3-(4, 5)-dimethylthiahiazo-(-z-y1)-3, 5-di-phenytetrazoliumromide (MTT) dye reduction assay with minor modifications. Briefly, after incubation with this compound, 20 μL MTT solution (5 mg/mL in PBS) is added to 180 μL medium in each well and plates are incubated for 4 hours at 37 °C, and subsequently 150 μL DMSO is added to each well, and mixed by shaking at room temperature for 15 minutes. Absorption is measured by an enzyme-linked immunosorbent assay at 490 nm to determine absorbance values. α-MEM supplemented with the same amount of MTT solution and solvent is used as blank solution. The IC50 value is calculated using PROBIT program in SPSS.

Heterozygous PDAPP transgenic mice overexpressing the APPV717F mutant form of the amyloid precursor protein.

≤100 mg/kg

Administered via p.o.