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In vivo (Ajouter les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble. * Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre. * Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)
Préparation des solutions mères
Activité biologique
Description
DBeQ (JRF 12) est un inhibiteur sélectif, puissant, réversible et ATP-compétitif de p97 avec une IC50 de 1,5 μM.
Cibles
p97
1.5 μM
In vitro
DBeQ bloque la dégradation de UbG76V-GFP, ODD-Luc et Luc-ODC avec des IC50 de 2,6 μM, 56 μM et 45 μM dans les cellules HeLa. Ce composé est au moins 50 fois moins puissant envers le facteur sensible au N-éthylmaléimide (NSF) et le protéasome 26S. Il inhibe p97 de manière compétitive par rapport à l'ATP, avec un Ki de 3,2 μM, suggérant qu'il se lie au site actif du domaine D2. Ce composé (10 μM) bloque puissamment la dégradation de TCR
-GFP dans les cellules HEK293. Il induit CHOP dans les 3 heures de manière concentration-dépendante mais n'augmente pas le niveau de p21 dans les cellules HEK293. Ce composé (15 μM) induit une forte accumulation de LC3-II dans le noyau, ainsi que dans les fractions enrichies en membrane et cytosoliques des cellules Hela. Il agit en bloquant la dégradation autophagique de LC3-II au lieu d'induire l'autophagie dans les cellules HeLa. Ce composé (10 μM) favorise rapidement l'activation des caspases exécutrices -3 et -7 dans les cellules HeLa. Il active la voie apoptotique intrinsèque de la caspase-9 plus que la voie extrinsèque de la caspase-8, tandis que le STS active les deux voies dans une mesure similaire. Ce composé est cinq fois plus actif contre les cellules de myélome multiple (RPMI8226) que contre les fibroblastes pulmonaires fœtaux humains normaux (MRC5), les cellules HeLa et Hek293 montrant des sensibilités intermédiaires. Il présente une sélectivité de 20 fois pour la stabilisation des substrats rapporteurs UPS dépendants de p97 par rapport aux indépendants dans les cellules HeLa. Ce produit chimique altère la dégradation des substrats dans les voies ERAD et d'autophagie. Il (12 μM) inhibe la neutralisation intracellulaire de manière dose-dépendante dans les cellules HeLa. Ce composé (10 μM), qui inhibe complètement la dégradation du virus et de l'anticorps dans l'expérience de devenir de la capside, ne parvient pas à empêcher la dégradation de l'IgG Fc. Il (9 μM) réduit le gradient initial de neutralisation en fonction de la concentration d'anticorps. Ce composé diminue la phosphorylation basale et stimulée par les nutriments des cibles de MTOR, de manière similaire aux effets de la rapamycine dans les cellules U20S.
Caractéristiques
Induit rapidement et puissamment l'activation des caspases exécutrices et la mort cellulaire.
Le tampon de dosage [20 μL d'une concentration 2,5×, où 1× = 50 mM Tris (pH 7,4), 20 mM MgCl2, 1 mM EDTA et 0,5 mM tris(2-carboxyéthyl)phosphine (TCEP)] est distribué dans chaque puits d'une plaque à 96 puits. La p97 purifiée (25 μL de 50 μM) est diluée dans 975 μL de tampon de dosage 1×, et 10 μL sont distribués dans chaque puits. Ce composé (10 μL) ou 5 % de DMSO (10 μL) est ensuite ajouté à chaque puits, et la plaque est incubée à température ambiante pendant 10 min. Le dosage de l'ATPase est effectué en ajoutant à chaque puits 10 μL d'ATP 500 μM (pH 7,5), en incubant à température ambiante pendant 60 min, puis en ajoutant 50 μL de réactif Kinase Glo Plus, suivi d'une incubation finale de 10 min à température ambiante dans l'obscurité. La luminescence est lue sur un Analyst AD. Ce produit chimique est dosé à différentes concentrations (0, 0,048, 0,24, 1,2, 6 et 30 μM) en triple exemplaire.
Cells are seeded on a 384-well solid white plate (5,000 cells/well). Cells are transfected with luciferase siRNA or p97 siRNA (10 nM) for 48 hours or treated with DBeQ for the indicated amount of time. Caspase-3/7 Glo, caspase-6 Glo, caspase-8 Glo, or caspase-9 Glo is added into each well and mixed by shaking at 500 rpm for 1 min. Luminescence signal is determined after incubation at room temperature for 1 hour. Cellular viability is determined with CellTiter-Glo reagen. To determine the IC50 of cellular viability, cells are treated with MG132 or this compound at seven concentrations (threefold serial dilutions starting at 33 μM) for 48 hours. IC50 values are calculated from fitting the percentage of luminescence signal normalized to DMSO treated cells).
Références
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21383145/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21606684/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23091005/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23439279/
Sellecks DBeQ A été cité par 11 Publications
Ubiquitin regulatory X (UBX) domain-containing protein 6 is essential for autophagy induction and inflammation control in macrophages
[ Cell Mol Immunol, 2024, 10.1038/s41423-024-01222-1]
White spot syndrome virus benefits from endosomal trafficking, substantially facilitated by a valosin-containing protein, to escape autophagic elimination and propagate in crustacean Cherax quadricarinatus
[ J Virol, 2020, JVI.01570-20]
Functional cooperativity of p97 and histone deacetylase 6 in mediating DNA repair in mantle cell lymphoma cells
[Vekaria PH Leukemia, 2019, 10.1038/s41375-018-0355-y]
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