Dinaciclib (SCH 727965)

Dinaciclib est également un puissant inhibiteur de la réplication de l'ADN qui bloque l'incorporation d'ADN de thymidine (dThd) dans les cellules A2780 avec une IC50 de 4 nM. Ce composé supprime fortement la phosphorylation de Rb sur Ser 807/811 à des concentrations >6,25 nM, ce qui est en accord avec l'observation que des concentrations de 4 nM sont nécessaires pour une inhibition de 50 % de l'incorporation d'ADN dThd dans le même modèle cellulaire. De manière significative, la suppression complète de la phosphorylation de Rb est corrélée à l'apparition de l'apoptose, comme l'indique l'apparition du produit de clivage PARP p85 dans les cellules exposées à >6,25 nM de cette substance chimique. Il est actif contre un large spectre de lignées de cellules tumorales humaines. [1] L'ajout de ce composé pendant l'exposition supprime également l'accumulation de γ-H2AX, d'une manière dose-dépendante. [2] Il inhibe la prolifération des cellules de mélanome et conduit les cellules de mélanome à une apoptose massive. [3] Cette substance chimique induit l'apoptose de plusieurs lignées de cellules d'ostéosarcome, y compris celles résistantes à la doxorubicine. Elle atténue la phosphorylation de l'RNAP II à la sérine 2 et la phosphorylation de l'inhibiteur de CDK p27^Kip1 à la thréonine 187. Des réductions de l'activité de phosphorylation se produisent à 12 - 40 nM de ce composé (4 à 16 heures après l'ajout). Il réduit également la phosphorylation de Rb à la sérine 807/811. Cette substance chimique induit l'apoptose des cellules U2OS mock- et p53-déplétées dans une mesure similaire. [4]

L'administration i.p. de Dinaciclib à 8, 16, 32 et 48 mg/kg par jour pendant 10 jours entraîne une inhibition tumorale de 70 %, 70 %, 89 % et 96 %, respectivement. La MED (dose efficace minimale) de ce composé semble être <8 mg/kg. Il est bien toléré, et la perte de poids corporel maximale dans le groupe à la dose la plus élevée est de 5 %. Cette substance chimique a une activité antitumorale dose-dépendante in vivo, et une inhibition presque complète de la croissance tumorale se produit à une dose inférieure à la MTD (dose maximale tolérée). Il a une courte demi-vie plasmatique chez la souris. [1]

• Essai de kinase Cyclin/CDK

  Les holoenzymes cycline/CDK recombinants sont purifiés à partir de cellules Sf9 conçues pour produire des baculovirus qui expriment une cycline ou une CDK spécifique. Les complexes cycline/CDK sont généralement dilués à une concentration finale de 50 μg/mL dans un tampon de réaction kinase contenant 50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT et 0,1 mM orthovanadate de sodium. Pour chaque réaction kinase, 1 μg d'enzyme et 20 μL d'une solution de substrat de 2 μM (un peptide biotinylé dérivé de l'histone H1) sont mélangés et combinés avec 10 μL de ce composé dilué. La réaction est initiée par l'ajout de 50 μL d'ATP 2 μM et de 0,1 μCi de ³³P-ATP. Les réactions kinases sont incubées pendant 1 heure à température ambiante et sont arrêtées par l'ajout de 0,1 % de Triton X-100, 1 mM d'ATP, 5 mM d'EDTA et 5 mg/mL de billes SPA revêtues de streptavidine. Les billes SPA sont capturées à l'aide d'une plaque de filtration GF/B à 96 puits et d'un récolteur universel Filtermate. Les billes sont lavées deux fois avec du NaCl 2 M et deux fois avec du NaCl 2 M contenant 1 % d'acide phosphorique. Le signal est ensuite analysé à l'aide d'un compteur à scintillation liquide TopCount à 96 puits.

• Lignées cellulaires

  A2780 cells

• Concentrations

  0 μM -5 μM

• Temps dincubation

  24 hours

• Méthode

  A2780 cells are maintained in DMEM plus 10% fetal bovine serum and passaged twice weekly by detaching the monolayer with trypsin-EDTA. One hundred microliters of A2780 cells (5 × 10³ cells) are added per well to a 96-well Cytostar-T plate and incubated for 16 hours to 24 hours at 37 °C. Dinaciclib is serially diluted in complete media plus 2% ¹⁴C-labeled dThd. Media are removed from the Cytostar T plate; 200 μL of various this compound dilutions are added in quadruplicate; and the cells are incubated for 24 hours at 37 °C. Accumulated incorporation of radiolabel is assayed using scintillation proximity and measured on a TopCoun^TM.

• Modèles animaux

  Nude mice bearing A2780 tumors

• Posologies

  8 mg/kg, 16 mg/kg, 32 mg/kg, and 48 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p.