GSK1349572 (Dolutegravir)

Le Dolutegravir (GSK1349572) montre un puissant effet inhibiteur sur neuf isolats cliniques de patients infectés par le VIH-2 naïfs aux inhibiteurs d'intégrase avec une CE50 allant de 0,2 nM à 1,4 nM.[1]

In vitro, il inhibe le transfert de brin catalysé par l'intégrase du VIH-1 recombinant avec une IC50 de 2,7 nM. De plus, ce composé inhibe puissamment la réplication du VIH dans des cellules telles que les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC), les cellules MT-4 et les cellules CIP4 infectées par un vecteur lentiviral PHIV auto-inactivant, avec des valeurs de CE50 de 0,51 nM, 0,71 nM et 2,2 nM, respectivement.[2]

In vitro, il présente également une activité puissante contre cinq virus différents résistants aux inhibiteurs de la transcriptase inverse non nucléosidiques ou aux inhibiteurs de la transcriptase inverse nucléosidiques, avec une CE50 allant de 1,3 nM à 2,1 nM. Similairement à son activité contre le virus de type sauvage, il montre une efficacité équivalente contre deux virus résistants aux inhibiteurs de protéase, avec des valeurs de CE50 de 0,36 nM et 0,37 nM, respectivement.[2]

Le Dolutegravir (GSK1349572), un médicament antirétroviral (ARV) de première ligne utilisé en polythérapie contre le VIH-1, inhibe l'activité MMP et a le potentiel d'affecter le neurodéveloppement prénatal et postnatal.

• Essai de transfert de brin in vitro

  Les puissances inhibitrices de Dolutegravir (GSK1349572) et d'autres INI sont mesurées dans un essai de transfert de brin utilisant l'intégrase du VIH recombinante. Un complexe d'intégrase et de billes de dosage de proximité par scintillation (SPA) recouvertes de streptavidine-ADN donneur biothinylé prétraité est formé en incubant 2 μM d'intégrase recombinante purifiée avec 0,66 μM de billes SPA recouvertes de streptavidine-ADN donneur biothinylé de 4 mg/mL dans 25 mM d'acide morpholinepropanesulfonique de sodium (MOPS) (pH 7,2), 23 mM de NaCl et 10 mM de MgCl₂ pendant 5 minutes à 37 °C. Ces billes sont centrifugées et préincubées avec des INI dilués pendant 60 minutes à 37 °C. Ensuite, un substrat d'ADN cible marqué au ₃H est ajouté pour donner une concentration finale de 7 nM de substrat, et le mélange réactionnel de transfert de brin est incubé à 37 °C pendant 25 à 45 minutes, ce qui permet une augmentation linéaire du transfert de brin de l'ADN donneur à l'ADN cible radiomarqué. Le signal est lu à l'aide d'un lecteur de plaques de scintillation Wallac MicroBeta.

• Lignées cellulaires

  MT-4

• Concentrations

  0 to 10 μM

• Temps dincubation

  4 days or 5 days

• Méthode

  Exponentially growing MT-4 cells at a density of 500,000 or 600,000/mL are infected with HIV-1 strain IIIB at a viral multiplicity of infection of 0.001 or a 50% tissue culture infective dose of 4 to 10. The cells are then aliquoted to 96-well plates in the presence of varying concentrations of Dolutegravir (GSK1349572). After incubation for 4 or 5 days, antiviral activity is determined by a cell viability assay that either measured bioluminescence with a CellTiter-Glo luminescent reagent or measured absorbance at 560 and 690 nm using the yellow tetrazolium MTT reagent [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide].

• Modèles animaux

  C3H/HeJ mice

• Posologies

  50 mg/kg

• Administration

  o.g.